脳内にｓｉＲＮＡを送達する高分子ミセルの創製とアルツハイマー病の標的治療への展開

创建将 siRNA 递送至大脑的聚合物胶束并开发阿尔茨海默病的靶向治疗

基本信息

批准号：
13F03349
负责人：
片岡一則
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

siRNAを脳内へ送達しアルツハイマー病治療を検討した。具体的には脳実質部のニューロンのみに局在し、アルツハイマー病発症の原因物質の一つとして考えられるアミロイドβ(Aβ)産生に関わるβ-セクレターゼ(BACE)の発現を抑制するsiRNA (siBACE1)を用いた。また高分子ミセル(Gluc(6)/siBACE1/m)は、トリブロック共重合体のα末端にグルコースを導入した高分子を用いて調製し、直径30 nmで単分散であること動的光散乱測定および透過型電子顕微鏡観察より確認した。Gluc(6)/siBACE1/mはマウスの胎児より回収したPrimary Neuronに対してnaked siBACE1よち優位に取り込まれ、さらにBACE1の発現抑制効果においても最大で90%のノックダウン効率が認められた。またGluc(6)/siBACE1/mの体内動態を評価したところ、脳への優位な集積が確認された。特にグルコースリガンド密度25%については、投与量の約1.2%dose/gが脳へ集積した。続いて脳内でのGluc(6)/siBACE1/mの分布について二光子レーザーを搭載したIVRTCLSMおよび、脳切片の蛍光免疫染色を行いCLSMで観察を行ったところ、投与4時間後に脳深部の実質部における分布が多く確認され、BBBを通過した多くのGluc(6)/siBACE1/mが標的とするニューロンへ集積していることが明らかになった。そこで、in vivoの環境においてもsiBACE1が機能しているか内因性マウスBACE1のmRNAの抑制を定量的RT-PCRで評価したところ、単回投与で最大で約30%ノックダウンしていることが明らかになった。

我们研究了通过将 siRNA 递送至大脑来治疗阿尔茨海默病。具体而言，siRNA (siBACE1) 可抑制 β 分泌酶 (BACE) 的表达，该酶仅位于脑实质的神经元中，并参与 β 淀粉样蛋白 (Aβ) 的产生，而β淀粉样蛋白 (Aβ) 被认为是致病原因之一。使用了阿尔茨海默氏病的发作剂。此外，使用在三嵌段共聚物的α末端引入葡萄糖的聚合物制备聚合物胶束(Gluc(6)/siBACE1/m)，并且是单分散的，直径为30nm。动态光散射通过使用透射电子显微镜的测量和观察来确认。 Gluc(6)/siBACE1/m 比裸露的 siBACE1 更容易被从小鼠胎儿中恢复的原代神经元吸收，并且在抑制 BACE1 表达方面观察到高达 90% 的敲低效率。此外，当我们评估 Gluc(6)/siBACE1/m 的药代动力学时，我们证实它主要在大脑中积累。特别地，当葡萄糖配体密度为25％时，给药量的约1.2％剂量/g在脑中蓄积。接下来，使用配备双光子激光的IVRTCLSM和脑切片的荧光免疫染色观察Gluc(6)/siBACE1/m在脑中的分布，发现给药4小时后，观察到深部脑实质。证实大量Gluc(6)/siBACE1/m通过BBB并在靶神经元中积累。因此，我们通过定量RT-PCR评估了siBACE1在体内环境中是否发挥作用，对内源性小鼠BACE1 mRNA的抑制作用，结果表明单次给药可导致高达约30%的抑制。