減数分裂期組換えの機能解析

减数分裂重组的功能分析

基本信息

批准号：
10044220
负责人：
太田力
金额：
$ 2.24万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

1. 研究目的:高等真核生物の組換え機構は、減数分裂期組換え、DNA障害の修復、抗体産主の多様性の確立および細胞周期の制御などの生物の基本的現象に関わっている。本共同研究は上記の基本的な現象を分子レベルおよび染色体レベルで解明することを目指して以下のことを計画してた。(1) 組換えを直接行う酵素である組換え蛋白質複合体を精製する。(2) 組換えのホットスポット領域の特徴的な構造を調べるために、組換え開始変異酵母株を用いた減数分裂期における組換えのホットスポット領域を解析する。2.研究成果:太田、小川は酵母の遺伝学的研究から相同組換えの最初の反応である二本鎖DNAの切断に関与すると考えられているMRE11遺伝子のアミノ末端にflag-tag(Asp-Tyr-Lye-Asp-Asp-Asp-Asp-Lyeの8個のアミノ酸)を付けたものを酵母で発現させflag-tagに対する抗体力ラムを用いてMRE11蛋白質複合体を精製することに成功した。このMRE11蛋白質複合体は一本鎖DNAおよび二本鎖DNAの切断活性を持つことが分かった。また、大腸菌を用いた組換え体MRE11蛋白質単独の活性を調べた結果、酵母から精製したMRE11蛋白質複合体と同様の活性が検出された。太田、小川はこの研究成果をアメリカ合衆国ニューロンドンで開かれたゴードン国際会議で発表し、共同研究者であるMichael Lichtenと今後の打ち合わせを行った。また、Michael Lichtenは組換えのホットスポット領域の詳細なDNA構造解析のためのサザンプロット法を確立し、ARG4とTHR領域で生じる二重鎖切断点をDNA塩基配列上で決定した。その成果を報告するため国立遺伝学研究所を訪れ、今後の共同研究の進め方を協議した。

1。研究目标：较高真核生物的重组机制参与基本生物现象，例如减数分裂重组，DNA损伤的修复，在抗体生产者中建立多样性和控制细胞周期。这项联合研究旨在在分子和染色体水平上阐明上述基本现象：（1）纯化重组蛋白复合物，该蛋白复合物是一种直接经历重组的酶。（2）为了研究重组热点区域的特征结构，我们使用重组引起的突变酵母菌菌株分析了减数分裂期重组热点区域。 2. Research results: Ota and Ogawa expressed the amino terminal of the MRE11 gene, which is thought to be involved in the cleavage of double-stranded DNA, the first reaction of homologous recombination, in yeast, with flag-tag (8 amino acids of Asp-Tyr-Lye-Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Lye) in yeast, and successfully purified the MRE11 protein complex using antibody force RAM到标记标签。发现该MRE11蛋白复合物具有单链和双链DNA裂解活性。此外，研究了仅使用大肠杆菌的重组MRE11蛋白的活性，并检测到与从酵母中纯化的MRE11蛋白复合物相似的活性。 OTA和OGAWA在美国新伦敦举行的戈登国际会议上提出了他们的发现，并与合作者迈克尔·利希滕（Michael Lichten）举行了未来会议。迈克尔·利希滕（Michael Lichten）还建立了一种南方图方法，用于重组热点区域的详细DNA结构分析，并确定了DNA碱基序列上ARG4和THR区域中发生的双链断点。为了报告结果，我们访问了美国国家遗传学研究所，并讨论了如何进行未来的联合研究。