クロマチン構造を介した組換え反応の機能解析

染色质结构介导的重组反应的功能分析

基本信息

批准号：
10159216
负责人：
太田力
金额：
$ 1.28万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1. 研究の目的: 真核生物の遺伝的組換えは、減数分裂期組換え、DNA傷害の修復、DNA複製時エラーの除去、遺伝子発現制御など多方面で機能して、生物の多様性と子孫の安定な保持において重要な役割を担っている。特に、組換えは減数分裂期で高頻度で起こり、出芽酵母では、これまで数十個の遺伝子が同定され、3つのグループに分けられている。即ち、組換えを制御するグループ(I)、組換えの開始である二本鎖DNA切断の導入に関与するもの(II)、相同DNAの検索、対合と交叉に働くもの(III)である。これら3つのグループの遺伝子産物は蛋白質複合体を形成することがTwo-Hybrid法、共同的免疫沈降法及び遺伝的解析から示唆されている。本研究では組換えを行う蛋白質複合体を分離、精製し、その構成及び各成分の機能解析と組換えを効率よく行う染色体構造の解析を目的とした。2. 研究成果: 酵母の遺伝学的研究から相同組換えの最初の反応である二本鎖DNAの切断に関与すると考えられているMRE11遺伝子のアミノ末端にflag-tag(Asp-Tyr-Lyc-Asp-Asp-Asp-Asp-Lyeの8個のアミノ酸)を付けたものを酵母で発現させflag-tagに対する抗体カラムを用いてMRE11蛋白質複合体を精製することに成功した。このMRE11蛋白質複合体は一本鎖DNAおよび二本鎖DNAの切断活性を持つことが分かった。また、大腸菌を用いた組換え体MRE11蛋白質単独の活性を調べた結果、酵母から精製したMRE11蛋白質複合体と同様の活性が検出された。

1.研究目的：真核生物中的基因重组以多种方式发挥作用，包括减数分裂重组、DNA损伤修复、DNA复制过程中错误的去除以及基因表达的调节，对生物体的多样性发挥着重要作用。在后代的稳定维持上。特别是减数分裂期间重组频繁发生，在酿酒酵母中，已鉴定出数十个基因并分为三组。也就是说，控制重组的基团 (I)、参与引入启动重组的双链 DNA 断裂的基团 (II) 以及负责寻找同源 DNA、配对和交叉的基团 (III) ）。双杂交法、协同免疫沉淀法和遗传分析表明这三组基因产物形成了蛋白质复合物。本研究的目的是分离和纯化进行重组的蛋白质复合物，分析其组成和各成分的功能，并分析允许有效重组的染色体结构。 2.研究成果：基于酵母遗传学研究，在酵母中表达了一个flag-tag（Asp-Tyr-Lyc-Asp-Asp-Asp-Asp-Lye（8个氨基酸）），并成功纯化了MRE11蛋白复合物针对标记标签的抗体柱。人们发现这种 MRE11 蛋白复合物具有单链 DNA 和双链 DNA 切割活性。此外，使用大肠杆菌检查重组MRE11蛋白单独的活性，结果检测到与从酵母纯化的MRE11蛋白复合物相似的活性。