免疫組織化学的手法による種子中ジベレリンについての動態解析

免疫组织化学法动态分析种子中赤霉素

基本信息

批准号：
08760114
负责人：
中嶋正敏
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.目的高等植物の生長に必須であり種々の生理現象に関与するジベレリンは、一般には未熟種子内に高濃度に存在することが報告されている。特に双子葉植物の場合、これらの役割や生産場所・時期、代謝・移動様式等については不明な点が多く非常に興味深い。そこで、それらの局在性について成熟途上のアサガオ未熟種子を材料に用い活性型ジベレリンに焦点を絞った組織内分布に関する解析を計画した。2.方法および成果開花後2週間前後の未熟種子を採取し、直ちに連続48時間の凍結乾燥処理を行い、カルボジイミド系ガスによる固定化反応を施した。包埋用樹脂にはパラフィンを用い硬度の設定等を行った後に薄切片を調製した。活性型ジベレリンに対する特異抗体を用いた免疫学的定量分析法により種子内における内生量について算定を行い、存在量が検出感度を上回るレベルであることを確認した。その上でパラフィン切片を調製しペルオキシダーゼ標識による免疫組織化学を行った。形態的な特徴として用いた未熟種子では幼根が認められるものの子葉部はあまり発達しておらず、胚乳様物質の存在が若干認められた。その状況の中で免疫組織化学の結果、子葉の一部にジベレリン特異的と考えられる染色部位が観察された。すなわち、正常血清や活性型ジベレリンを予め反応させた特異抗体等を用いた対照区ではそのような有意な染色は認められなかった。これらの局在部位については現在くわしく検討中である。定量分析の結果より種子中において、用いた抗体に反応するものの大部分がGA1またはGA3であり、抗体に反応性を有する配糖体等はほとんど検出されなかったことから、アサガオ種子は純粋に活性型ジベレルンに限定した動態解析を行う場合の好適材料であり、本研究によりその基盤技術を構築することができたと考えている。

1. 目的赤霉素是高等植物生长所必需的，并参与各种生理现象，据报道通常在未成熟种子中以高浓度存在。特别是双子叶植物，它们的作用、产生地点和时间、代谢和运动模式还有许多未知之处，这使得它们非常有趣。因此，我们计划使用仍在成熟过程中的未成熟牵牛花种子来分析它们在组织中的定位，重点关注活性赤霉素。 2.方法和结果开花后约两周收集未成熟种子，立即冷冻干燥48小时，然后用碳二亚胺气体固定。使用石蜡作为包埋树脂，设定硬度等后制作薄片。使用针对活性赤霉素的特异性抗体，通过免疫学定量分析方法计算种子中的内源量，并确认其存在量超过检测灵敏度。然后制备石蜡切片并使用过氧化物酶标记进行免疫组织化学。在用于形态特征的未成熟种子中，观察到胚根，但子叶部分不是很发达，并且观察到存在一些胚乳样物质。在这些情况下，作为免疫组织化学的结果，在一些子叶中观察到被认为是赤霉素特异性的染色位点。即，在使用正常血清或预先与活性赤霉素反应的特异性抗体的对照组中未观察到如此显着的染色。目前正在对这些本地站点进行详细调查。定量分析结果显示，与种子中所用抗体发生反应的物质大部分为GA1或GA3，几乎没有检测到与抗体发生反应的苷类，说明牵牛花种子是纯活性的。适合进行动态分析的材料仅限于赤霉素类型，我们相信这项研究使我们能够为此目的建立基础技术。