生理現象に基づいた植物ホルモンの局在性に関する免疫組織化学的研究

基于生理现象的植物激素定位的免疫组织化学研究

基本信息

批准号：
07760115
负责人：
中嶋正敏
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760115/
关键词：
植物ホルモンオーキシンインドール酢酸ニトロセルロース膜

项目摘要

1.研究目的高等植物の成長・分化に必須で、茎部における屈光性や背地性など種々の生理現象に重要なはたらきをしていると考えられているオーキシンを研究対象とし、その極性移動や特有の生理現象とその動態との関連性を免疫組織化学的に解析することを目的とする。特に組織切片の調製時における微細構造の保存に関して、氷晶形成が少なく状態の良い薄切片の調製を検討する。2.研究方法および成果オーキシンの固定化効率および検出限界の検討を初めに行うため、ニトロセルロース膜を用いたモデル系を用いて最適化を図った。各種キャリアータンパク質を吸着させた膜上でパラホルムアルデヒド等の固定試薬の蒸気による固定化、免疫染色・増感反応によりおよそ数ナノグラムレベルのインドール酢酸が認識可能となった.続いて、アズキ幼植物体の上胚軸基部を用いて外生的にさまざまな濃度のインドール酢酸を吸収させ、細切し、急速凍結・凍結乾燥した後、気化させたパラホルムアルデヒド蒸気およびイソプロピルカルボジイミド蒸気等の固定化試薬を処理してパラフィン包埋した。これより調製された薄切片を染色することにより、固定用ガスの組成・固定時間・温度条件などの検討を行った。この結果、正常血清と比較して抗オーキシン抗血清を用いた染色の場合に有意な染色像が認められたものの、非特異的染色が強く、新たに改良すべき問題が生じた。そこで、ブロッキング剤の使用方法や用いる切片の厚さ、発色方法について各種の検討を行った。多少の改善は認められたが、現段階においてもなお正常血清を用いてもかなりの非特異的な染色が残っており、更なる改善策を講じる必要がある。また、組織の凍結乾燥において氷晶形成を抑えるためには、乾燥中の環境を氷点下マイナス15℃から20℃の間で継続して維持することが有効で、これ以下の温度環境では乾燥に多くの時間を費やさねばならず実用的では無いことが明らかとなった。これらの基礎技術は多くの免疫組織化学に応用できると考えている.

1。研究目的，对于高植物的生长和区分至关重要，被认为是各种生理现象的重要功能，例如茎的灵活性和背景，目的是分析独特的生理现象和它的动态态度。特别是，关于在切割组织过程中保存细小结构，考虑了小煎炸的制备，并考虑了小冰晶体形成。 2。为了首先检查研究方法和AXIN的固定效率和检测极限，我们使用硝酸纤维素膜使用模型系统进行了优化。大约几个纳米图 - 吲哚乙酸已通过固定试剂（例如多聚甲醛）在膜上识别出，这些试剂使用上胚胎轴和一致的膜上吸附了各种载体肿瘤，然后吸收，粉碎，油炸，油炸，炸鸡干燥。在迅速煎炸并冷冻干燥后，固定蒸发的丙二醛蒸汽和异托胺。通过染色准备的薄片，我们检查了固定气体的组成，固定时间，温度条件等。结果，与正常血清相比，使用抗X型抗蛋白抗毛体染色的情况下，识别出明显的染色图像，但是出现了新的改善问题。因此，对如何使用阻滞剂，所用切割的厚度以及颜色开发方法进行了各种检查。尽管已经批准了一些改进，但即使在此阶段，即使仍然使用了正常的血清，也有必要采取进一步的改进措施。另外，为了抑制组织冷冻和干燥的冰晶形成，可以有效地维持负15°C至20°C之间的干燥环境，并且在较低的温度环境中经常干燥花时间不切实际。我们认为这些基本技术可以应用于许多免疫组织化学。