免疫組織化学的手法によるオーキシンの動態および局在性に関する研究

利用免疫组织化学技术研究生长素动力学和定位

基本信息

批准号：
05760095
负责人：
中嶋正敏
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.研究目的各種の物理化学的分析により、器官レベルにおける植物ホルモンの量的な解析については数多く報告されているが、組織レベルでの解析例はほとんどない。また、申請者らは植物ホルモンと特異的に結合する数種の抗体の調製を既に完了している。そこで本研究では、初めに植物ホルモンの組織への固定化についてニトロセルロース膜を用いたモデル系で設定を行い、固定効率の最適化を図った後、植物ホルモンの関与が示唆される生理現象に着目し、抗体を用いた免疫学的手法によりそれらの組織内分布の解析を行うことを目的とする。2.研究方法および成果 BSA及びKLHタンパク質を吸着させたニトロセルロース膜上でパラホルムアルデヒド蒸気による固定化,銀増感・金コロイド法を用いた免疫染色により数ナノグラムのIAAが肉眼で検出可能となった.また、パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒド蒸気を併用した固定化により同レベルのt-zeatineも検出可能となった.このモデル系を応用し、ワサビ(Amoracia rusticana)毛状根におけるt-zeatineの組織内分布の解析を試みた。毛状根の先端を採取し凍結乾燥後、上述の蒸気固定を行い、寒天に包埋して緩衝溶液中にてマイクロスライサ-で薄切片を調製した.蛍光標識二次抗体を用いて染色後、蛍光顕微鏡で観察した.これより各種対照区では蛍光が観察されず、t-zeatineが局在すると想定される先端部では有意に蛍光が観察された.今回、マイクロスライサ-を導入したことにより、包埋操作に要する時間の簡略化が図れた上,組織内への樹脂の浸透促進剤として使用していた有機溶媒が不要となり、固定された植物ホルモンの、抗体に対する親和性を損なう恐れの少ない薄切片調製が可能になった.これらの基礎技術は多くの免疫組織化学に応用できると考えている.

1.研究目的虽然利用各种理化分析在器官水平上定量分析植物激素的报道很多，但在组织水平上分析的例子却很少。此外，申请人已经完成了多种与植物激素特异性结合的抗体的制备。因此，在本研究中，我们首先建立了使用硝酸纤维素膜将植物激素固定在组织中的模型系统，在优化固定效率后，我们研究了表明植物激素参与的生理现象。本研究的目的是分析。使用抗体的免疫学方法来确定它们的组织分布。 2.研究方法和结果通过用多聚甲醛蒸气固定在吸附有BSA和KLH蛋白的硝酸纤维素膜上，并使用银敏化和胶体金方法进行免疫染色，可以用肉眼检测到几纳克的IAA，此外，还可以检测到相同水平的IAA。还可以通过使用多聚甲醛和戊二醛蒸气的组合进行固定化来检测 t-玉米素。通过应用该模型系统，芥末 (Amoracia我们试图分析毛状根中 t-玉米碱的组织分布。收集毛根的尖端并冷冻干燥，然后如上所述进行蒸汽固定，包埋在琼脂中，并使用微切片机在缓冲溶液中制备成薄片。用荧光标记的二抗染色后进行观察。由此可知，在各对照切片中未观察到荧光，但在推测t-玉米素集中的尖端处观察到显着的荧光。 ICROSLICER的引入不仅简化了包埋程序所需的时间，而且还消除了对用作树脂渗透促进剂的有机溶剂进入组织的需要，从而允许使用固定化植物激素抗体。技术可应用于多种类型的免疫组织化学。