免疫組織化学的手法によるオーキシンの動態および局在性に関する研究

利用免疫组织化学技术研究生长素动力学和定位

基本信息

批准号：
05760095
负责人：
中嶋正敏
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.研究目的各種の物理化学的分析により、器官レベルにおける植物ホルモンの量的な解析については数多く報告されているが、組織レベルでの解析例はほとんどない。また、申請者らは植物ホルモンと特異的に結合する数種の抗体の調製を既に完了している。そこで本研究では、初めに植物ホルモンの組織への固定化についてニトロセルロース膜を用いたモデル系で設定を行い、固定効率の最適化を図った後、植物ホルモンの関与が示唆される生理現象に着目し、抗体を用いた免疫学的手法によりそれらの組織内分布の解析を行うことを目的とする。2.研究方法および成果 BSA及びKLHタンパク質を吸着させたニトロセルロース膜上でパラホルムアルデヒド蒸気による固定化,銀増感・金コロイド法を用いた免疫染色により数ナノグラムのIAAが肉眼で検出可能となった.また、パラホルムアルデヒドとグルタルアルデヒド蒸気を併用した固定化により同レベルのt-zeatineも検出可能となった.このモデル系を応用し、ワサビ(Amoracia rusticana)毛状根におけるt-zeatineの組織内分布の解析を試みた。毛状根の先端を採取し凍結乾燥後、上述の蒸気固定を行い、寒天に包埋して緩衝溶液中にてマイクロスライサ-で薄切片を調製した.蛍光標識二次抗体を用いて染色後、蛍光顕微鏡で観察した.これより各種対照区では蛍光が観察されず、t-zeatineが局在すると想定される先端部では有意に蛍光が観察された.今回、マイクロスライサ-を導入したことにより、包埋操作に要する時間の簡略化が図れた上,組織内への樹脂の浸透促進剤として使用していた有機溶媒が不要となり、固定された植物ホルモンの、抗体に対する親和性を損なう恐れの少ない薄切片調製が可能になった.これらの基礎技術は多くの免疫組織化学に応用できると考えている.

1。研究目标：已经通过各种物理化学分析报告了器官水平的植物激素的许多定量分析，但是在组织水平上几乎没有分析的例子。申请人还完成了几种专门结合植物激素的抗体的制备。因此，在这项研究中，目的是首先使用硝酸纤维素膜将植物激素固定在组织中，优化固定效率，然后专注于生理现象，建议使用抗体使用免疫学技术来分析植物激素的涉及植物激素，并提示植物激素的参与。 2。研究方法和结果：用吸附的BSA和KLH蛋白与硝酸醛蒸气固定在硝酸纤维素膜上，并使用银色敏化和胶体金方法的免疫染色使IAA的几种纳米图可见。此外，还可以检测到与多聚甲醛和戊二醛蒸气与T-齐丁的固定化。使用此模型系统，我们试图分析芥末根（Amoricia Rusticana）中T-齐氨酸的组织分布。收集毛根的尖端，冷冻干燥，然后蒸汽固定，然后嵌入琼脂中，并在缓冲溶液中使用微密码器制备薄部分。用荧光标记的二抗染色后，使用荧光显微镜观察了薄切片。因此，在各个对照切片中未观察到荧光，并且在假定T-齐氨酸局部局部的尖端观察到了显着的荧光。通过引入微固定器，不再需要简化嵌入的时间，并且不再需要将树脂渗透到组织中的有机溶剂作为增强子，因此可以制备较少可能损害抗体抗体植物激素的亲和力的薄部分。我们认为这些基本技术可以应用于许多免疫组织化学。