ソラマメラジカル消去タンパク成分によるカテプシンBと細胞エイジングに関する研究

利用Sorama自由基清除蛋白成分研究组织蛋白酶B与细胞衰老

基本信息

批准号：
09878008
负责人：
岡田悦政
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Chukyo Junior College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.長期培養下における実験(1)継代寿命延長効果の確認-ソラマメラジカル消去タンパク成分(WSP)1.25μg/ml、2.5μg/mlを培養細胞TIG-1のPDL20(若齢細胞)と、PDL50(老齢細胞)へ投与した。結果、最終的な継代寿命への延長効果は見られなかった。(2)継代時毎の細胞内抗酸化酵素活性、若齢細胞、老齢細胞に1.25μg/ml WSPを投与しながら継代培養を行い、若齢細胞についてはPDL40(28日目)、PDL50(42日目)を、老齢細胞についてはPDL60(20日目)、PDL70(40日目)の細胞内抗酸化酵素活性を測定した。サイトゾール内スーパーオキシドディスムターゼ(Cu,Zn,SOD)及び、グルタチオンペルオキシターゼ(GSH-Px)活性はコントロールに比べて酵素活性の増加は見られなかった。しかし、カタラーゼ活性については、WSP投与により、コントロールに比べ、実験を行った全ての群において酵素活性の上昇(30〜80%)が見られた。2.カテプシンB活性の測定(1)細胞分裂速度への影響-カテプシンB活性と細胞増殖速度との関連性は本実験に用いたヒト正常2倍体線維芽細胞(TIG-1)においては見られなかった。(2)各継代時-若齢細胞、老齢細胞に1.25μg/ml WSPを投与しながら継代培養を行った、若齢細胞群PDL40(28日目)、PDL50(42日目)、老齢細胞群PDL60(20日目)、PDL70(40日目)のカテプシンB活性を測定した。若齢細胞群PDL40(28日目)においてはカテプシンB活性の上昇は見られなかったが、PDL50(42日目)においては30%程の活性上昇が見られた。(3)老齢細胞期-老齢細胞群PDL60(20日目)、PDL70(40日目)のカテプシンB活性は、WSP投与による酵素活性の上昇は見られなかった。3.今後の研究展開WSPは、スーパーオキシド、II_2O_2を消去するラジカルスカベンジャーであるが、今回WSP投与による細胞内でのカタラーゼ活性の上昇が確認できた。過去の研究から細胞内抗酸化酵素活性は、細胞老化に伴い,SOD、GSH Pxは、不変または、増加傾向にある反面、カタラーゼ活性、及びグルタチオンは減少することが報告されている。故に、カタラーゼ活性を上昇させる結果となったWSP投与群は、細胞老化に対して何らかの影響を及ぼす可能性がある。更に、WSPは細胞増殖(WI-38)を促進させることが分かっているが(昨年度の科学研究費報告)、ガン細胞との関連性が報告されているカテプシンB活性は、正常細胞において、増殖との関係を明らかに出来ず、WSP投与によるカテプシンB活性の上昇も見られなかった。以上の結果をもとに、今後の展開は、WSPの細胞内での作用部位および、増殖因子等他の成分との比較検討、更に、細胞寿命の回数券とされるテロメア、及びテロメラーゼ酵素との関連性の検討を行うことにより、WSPの細胞老化、個体老化への有用性および、フリーラジカルと老化との機構を明らかにして行きたい。

1。在长期培养下进行实验（1）确认延长通道寿命-1.25μg/mL和2.5μg/ml的宽豆自由基脱位蛋白成分（WSP）的实验被施用至PDL20（Young-cells）（Young细胞）和PDL50（旧细胞）（旧细胞）（旧细胞）。结果，未观察到最终通过寿命的扩展效果。（2）在每次传递时间，幼体细胞和衰老细胞的细胞内抗氧化剂活性在给药1.25μg/mL WSP时进行亚培养，以及PDL40（第28天）和PDL50（第42天）的细胞内抗氧化酶的活性（第28天）和PDL60（日42天）和PDL60（日42）（日）和pdl60（Day）和PD。与对照组相比，在囊肿内超氧化物歧化酶（CU，Zn，SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性中，酶活性没有增加。然而，与对照组相比，在实验中所有组中的所有组中，WSP给药显示出酶活性的增加（30-80％）。 2。在本实验中使用的正常人二倍体成纤维细胞（TIG -1）中未观察到组织蛋白酶B活性（1）对细胞分裂速率的影响（1）对细胞分裂速率的影响。（2）测量了年轻细胞组PDL40（第28天），PDL50（第42天），PDL60（第20天）和PDL70（第40天）（第40天）中的组织蛋白酶B活性，在施用1.25μg/mL WSP时，对少年细胞和老化细胞进行了亚培养。在年轻的细胞组PDL40（第28天）中未观察到组织蛋白酶B活性的增加，但在PDL50（第42天）中观察到活性增加。（3）WSP给药的老年细胞阶段 - 老年细胞组PDL60（第20天）和PDL70（第40天）的组织蛋白酶B活性并未增加。 3。未来的研究发展：WSP是一种自由基清除剂，可去除超氧化物II_2O_2，并且已经证实，由于WSP给药，细胞内过量酶活性增加了。先前的研究报告说，细胞内抗氧化酶的活性随着细胞衰老而不断增加或增加，而过氧化氢酶的活性和谷胱甘肽降低。因此，导致过氧化氢酶活性增加的WSP管理组可能会对细胞衰老产生一定影响。此外，尽管已经发现WSP可以促进细胞增殖（WI-38）（报道了去年的科学研究赠款），但据报道，据报道与癌细胞相关的组织蛋白酶B活性在正常细胞中无法明确定义，并且在给药时未观察到组织蛋白酶B活性的增加。 Based on the above results, future developments will be to compare and examine the site of action of WSP within the cells, as well as other components such as growth factors, and also examine the relationship between telomeres, which are considered to be multiple-use tickets for cell lifespan, and telomerase enzymes, to clarify the usefulness of WSP for cell aging and individual aging, and the mechanisms between free radicals and aging.