病原性細菌の宿主翻訳系を標的とした感染戦略の分子機構の解析

针对病原菌宿主翻译系统的感染策略分子机制分析

基本信息

批准号：
13J09842
负责人：
木村聡
金额：
$ 2.76万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J09842/
关键词：
tRNA サルモネラ菌

项目摘要

本研究では実験系として、マウスにおいて全身感染を引き起こす病原性細菌であるサルモネラチフィムリウムによるin vitroの細胞感染実験を行うことを計画している。前年度までの成果としてまず、そのサルモネラチフィムリウムのマクロファージ様細胞への感染実験系の確立を行った。感染させる細胞としてマクロファージ様細胞として知られるRAW264.7細胞を用いた。千葉大学薬学部の山本友子教授の研究室において感染実験系の手法を教わると同時に細胞や菌株を譲渡していただき、感染実験を行えるように環境を整えた。さらにサルモネラ菌における遺伝学的解析を行うに当たり、遺伝子欠損株の作成、およびプラスミドの構築など、サルモネラ菌株における遺伝子操作方法も同時に教わり、それに必要な材料も譲渡していただいた。タンパク質合成を司るnon-coding RNAの一つであるtRNAには様々な化学修飾が施されていることが知られている(tRNA修飾)。CmoCというtRNAのヒドロキシル化を担っている遺伝子の欠損が感染力の減弱を引き起こすことがサルモネラ菌において報告されている。まず、この感染力の減弱が観察されるかについて遺伝子欠損株を構築し、検証した。しかしながら現時点において文献で報告されている感染力の減弱が観察するに至っていない。そのため感染力の減弱が観察される条件を現在検証中である。また種の異なる病原性細菌についても同様の可能性を検証するために、2月より米国に渡航し、Brigham and Women’s hospitalのWaldor研究室においてビブリオ属の実験系を学んでいる。いずれ候補遺伝子のスクリーニングにおいて用いる遺伝子欠損株ライブラリーの作成方法についても学ぶ予定である。

在这项研究中，我们计划用鼠伤寒沙门氏菌（一种引起小鼠全身感染的病原菌）进行体外细胞感染实验。去年的成果，我们首先建立了鼠伤寒沙门氏菌感染巨噬细胞样细胞的实验系统。 RAW264.7细胞，被称为巨噬细胞样细胞，被用作被感染的细胞。在千叶大学药学院山本智子教授的实验室，她学习了感染实验的方法，同时接收了细胞和菌株，创造了一个可以进行感染实验的环境。此外，为了对沙门氏菌进行遗传分析，我还学习了如何操作沙门氏菌菌株的基因，例如创建基因缺陷菌株和构建质粒，并为我提供了必要的材料。众所周知，tRNA是控制蛋白质合成的非编码RNA之一，会受到各种化学修饰（tRNA修饰）。据报道，负责 tRNA 羟基化的基因 CmoC 的缺失会导致肠道沙门氏菌感染性下降。首先，我们构建了一种基因缺陷菌株，并验证是否观察到感染性降低。但目前尚未观察到文献报道的传染性减弱现象。因此，我们目前正在研究观察到传染性降低的条件。为了验证不同种类的致病菌是否有同样的可能性，我从2月份开始就一直前往美国，正在布莱根妇女医院Waldor实验室了解弧菌的实验系统。我们还计划学习如何创建用于候选基因筛选的基因缺陷菌株库。