非アルコール性脂肪性肝疾患の治療に資するホスホリパーゼCの解明

阐明有助于治疗非酒精性脂肪肝的磷脂酶 C

• 批准号: 21K19327
• 负责人: 河野 望
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19327/
• 关键词: ホスホリパーゼC; ホスファチジルイノシトール; 非アルコール性脂肪性肝疾患

LPIAT1を欠損したHuh-7細胞は、LPIAT1欠損マウス肝臓と同様にアラキドン酸含有PI の減少とオレイン酸含有PI の増加、中性脂質の蓄積がみられる。この細胞に[14C]グリセロールを添加し、[14C]ラベルされたPI の分解を経時的に調べると、LPIAT1 KO 細胞では野生型に比べてPI の分解が顕著に亢進した。このLPIAT1欠損によるPI分解の亢進はマウス肝臓においてもみられ、分解産物の追跡から、PLC様の酵素が働いていることが示唆されている。本年度は細胞レベルでのPI 分解アッセイを利用して、各種阻害剤を添加し、PI分解を抑制する化合物をスクリーニングした。その結果、PLCの一般的な阻害剤であるU73122やリソソームの酸性化を抑制するクロロキンではLPIAT1 KO 細胞におけるPI分解の亢進を抑制できなかった。一方で、脂質のホスファターゼを抑制する阻害剤の1つがLPIAT1 KO 細胞におけるPI分解の亢進を抑制することを見出した。またLPIAT1 KO 細胞におけるPI分解の亢進において、分解されるPIに分子種特異性があるか調べるために、d8グリセロールラベルによる標識PIのLC-MSでの検出系を検討した。d8グリセロールの添加条件、LC条件、MRM条件を決定し、48時間のd8グリセロールラベルで10-15%のPIをラベルし、それらの逆相カラムを用いたLC-MS/MSにより個々に検出・定量することに成功した。

与 LPIAT1 缺陷的小鼠肝脏类似，缺乏 LPIAT1 的 Huh-7 细胞表现出含花生四烯酸的 PI 减少、含油酸的 PI 增加以及中性脂质积累。当将[14C]甘油添加到这些细胞中并检查[14C]标记的PI随时间的降解情况时，与野生型相比，LPIAT1 KO细胞中的PI降解显着加速。在小鼠肝脏中也观察到了由于 LPIAT1 缺乏而导致的 PI 降解增强，对降解产物的追踪表明类似 PLC 的酶正在发挥作用。今年，我们在细胞水平上使用了 PI 降解测定，并添加了各种抑制剂来筛选抑制 PI 降解的化合物。结果，PLC的通用抑制剂U73122和抑制溶酶体酸化的氯喹无法抑制LPIAT1 KO细胞中PI降解的加速。另一方面，我们发现其中一种脂质磷酸酶抑制剂可抑制 LPIAT1 KO 细胞中 PI 降解的加速。此外，为了研究LPIAT1 KO细胞中增强的PI降解中降解的PI是否存在分子种类特异性，我们研究了使用LC-MS的d8甘油标记的PI检测系统。确定d8甘油添加条件、LC条件和MRM条件，用48小时d8甘油标记标记10-15%PI，并使用反相色谱柱通过LC-MS/MS单独检测和检测，我们成功了。在量化它。

项目成果

超臨界流体クロマトグラフィー質量分析を用いた重水素標識ホスホイノシチドの分析

使用超临界流体色谱-质谱法分析氘标记的磷酸肌醇

• 发表时间: 2022
• 作者: 岩田紬;石野雄己;倪申ウェイ;河野望;青木淳賢
• 通讯作者: 青木淳賢

イノシトール欠乏によるIre1活性化におけるVps34の機能解明

阐明 Vps34 在肌醇缺乏引起的 Ire1 激活中的功能

• 发表时间: 2023
• 作者: 岩田 紬;山岸 洸太;張 琇ウェン;八代田英樹;村田茂穂;新井 洋由;河野 望;青木 淳賢
• 通讯作者: 青木 淳賢

飽和脂肪酸によって小胞体ストレス応答が起きる分子メカニズムの解明

阐明饱和脂肪酸诱导内质网应激反应的分子机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 倪申ウェイ;葛西峻輔;赤木聡介;青木淳賢;新井洋由;河野望
• 通讯作者: 河野望

胎児期大脳皮質形成過程におけるアラキドン酸含有ホスファチジルイノシトールの役割

含花生四烯酸的磷脂酰肌醇在胎儿大脑皮层形成过程中的作用

• 发表时间: 2021
• 作者: 石野 雄己; 河野 望; 桑山 尚大; 川口 大地; 岸 雄介; 後藤 由季子; 新井 洋由; 青木 淳賢
• 通讯作者: 青木 淳賢

α-Tocopherol transfer protein (α-TTP)

• DOI: 10.1016/j.freeradbiomed.2021.09.021
• 发表时间: 2021-10-04
• 期刊: FREE RADICAL BIOLOGY AND MEDICINE
• 影响因子: 7.4
• 作者: Arai, Hiroyuki;Kono, Nozomu
• 通讯作者: Kono, Nozomu