細胞培養下におけるβ2-ミクログロブリン関連アミロイド線維形成の機序解明

阐明细胞培养中β2-微球蛋白相关淀粉样原纤维形成的机制

基本信息

批准号：
19790577
负责人：
山本卓
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、申請者らの今までの研究成果を基にin vitroにおけるβ2-ミクログロブリン(β2-m)アミロイド線維形成のメカニズムとその促進ならびに阻害因子を明らかにすることにより、透析関連アミロイドーシスの発症機序の解明と治療薬開発を目指すものである。これらの成果を通して、最終的には透析関連アミロイドーシスの新たな予防法・治療法の開発に貢献することを目標とする。本年度研究期間内にβ2-mモノマーとヒト線維芽細胞を反応させ、IL-6、TNF-αなどの炎症性サイトカインの放出とその機序および特徴について明らかにすることを目標とした。ヒト滑膜細胞を培養し、培地にリコンビナントβ2-mを添加し培養した。培養液に増加するIL-6,TNF-αなどの炎症性サイトカインをELISA法、mRNAをリアルタイムPCR法にて測定したが、大きな反応を認めなかった。次に正常β2-mモノマーをAGE化したβ2-mに代えて同様の研究を行い、培養液中のIL-6の増加を認めた。しかし、反応後の培養液を用いてβ2-mアミロイド線維伸長反応の促進効果について蛍光色素チオフラビンTを用いた定量、電子顕微鏡での観察を行ったが、明らかな促進効果を認めなかった。今後は、AGE化したβ2-mの添加する量、反応時間を変更し、反応が最大に現れる条件を設定する。その条件で培養液を用いたβ2-mアミロイド線維形成・伸長反応の促進効果について確認したい。そのうえで培養中の線維伸長反応も行う予定である。以上の結果をまとめて透析関連アミロイドーシスにおけるβ2-mアミロイド線椎形成・伸長反応のメカニズムを明らかにし、本症の治療、あるいは予防となりうる因子、薬物を開発したい。

在本研究中，基于申请人之前的研究成果，我们将阐明β2-微球蛋白（β2-m）淀粉样原纤维在体外形成的机制及其促进和抑制因素，从而阐明预防透析相关淀粉样变性的目的。致病机制并开发治疗药物。通过这些结果，我们的目标是最终为透析相关淀粉样变性的新预防和治疗方法的开发做出贡献。我们的目标是在今年的研究期内将β2-m单体与人成纤维细胞反应，阐明IL-6和TNF-α等炎性细胞因子的释放及其机制和特点。培养人滑膜细胞，并向培养基中添加重组β2-m。 ELISA检测结果显示培养基中IL-6和TNF-α等炎症细胞因子增加，实时PCR检测mRNA水平增加，但未观察到明显反应。接下来，我们通过用 AGEd β2-m 替换正常的 β2-m 单体进行了类似的研究，并观察到培养基中 IL-6 的增加。然而，我们使用反应后的培养基，使用荧光染料硫磺素T进行定量测量并使用电子显微镜观察以确定β2-m淀粉样蛋白原纤维伸长反应的促进效果，但没有观察到明显的促进效果。今后，我们将改变AGE形成的β2-m的添加量和反应时间，设定使反应最大化的条件。我们想确认在这些条件下使用培养基促进β2-m淀粉样原纤维形成和伸长反应的效果。此外，我们计划在培养过程中进行纤维伸长反应。通过总结上述结果，我们希望阐明透析相关淀粉样变性中β2-m淀粉样蛋白丝椎体形成和伸长反应的机制，并开发可以治疗或预防该疾病的因子和药物。