新規がん抑制遺伝子RB1CC1の生体内機能解析

新型抑癌基因RB1CC1的体内功能分析

基本信息

批准号：
15689008
负责人：
茶野徳宏
金额：
$ 16.31万
依托单位：
Shiga University of Medical Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15689008/
关键词：
RB1CC1 gene targeting ES細胞 RB1 TSC conditional Cre-lox Red ET

项目摘要

新規のがん抑制遺伝子であるRB1CC1の細胞生物学的な機序、生体内における働きを明らかにし、将来的には治療、創薬にも結びつけることを目標として研究を行った。これまでに4種類のRb1cc1 targeting vectorsを構築し、組換えES細胞の樹立を図ってきた。各targeting vectorsにつき1,000個、計4,000個以上の薬剤耐性クローンのscreeningを行ってきたが、未だRb1cc1遺伝子相同組換えのおこったES細胞は樹立できていない。現在、version 5のconditional targeting vectorを用いて、組換えES細胞の樹立、conditional knock-out mouseの作成を継続進行中である。一方で、CAG-loxP-neo-loxP-FlagRB1CC1導入によるtransgenic mouseを作成した。現在4系統のマウスラインを樹立できており、現在、主にMEFを使って解析を進めているが、本マウスはCre発現のvirusやマウスを使って各種臓器にconditionalなRB1CC1過剰発現を起こすことができる。今後、異所性のRB1CC1過剰発現が生体に起こす変化を解析してゆく。一つはマウス骨格筋や骨自身に起こるRB1CC1の過剰発現が栄養飢餓ストレス耐性であるか否か等について、また一つは本来RB1CC1発現の乏しい造血器系などでRB1CC1過剰発現が起こったときの病態を解析してゆきたい。

我们开展研究的目的是阐明新型抑癌基因RB1CC1的细胞生物学机制和体内功能，并将其与未来的治疗和药物发现联系起来。目前，我们已经构建了四种类型的Rb1cc1靶向载体，并正在致力于建立重组ES细胞。尽管我们已经筛选了超过4,000个耐药克隆（每个靶向载体1,000个），但我们尚未能够建立发生Rb1cc1基因同源重组的ES细胞。目前，我们正在继续建立重组ES细胞，并使用第5版条件靶向载体创建条件敲除小鼠。另一方面，我们通过引入 CAG-loxP-neo-loxP-FlagRB1CC1 来创建转基因小鼠。目前，我们已经建立了四个小鼠系，目前我们主要使用MEF进行分析，但是这种小鼠能够使用表达Cre的病毒和小鼠在各个器官中引起条件性RB1CC1过度表达。未来，我们将分析异位RB1CC1过度表达在生物体中引起的变化。一是小鼠骨骼肌和骨骼本身发生的RB1CC1过度表达是否能够抵抗营养饥饿应激，我想分析其病理学。