抗がん遺伝子産物ＳＴＡＲＴ－ＧＡＰ／ＤＬＣファミリータンパク質の細胞内局在化機構

抗癌基因产物START-GAP/DLC家族蛋白的细胞内定位机制

基本信息

批准号：
22501016
负责人：
八木澤仁
金额：
$ 2.75万
依托单位：
University of Hyogo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010-04-01 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝子の欠失やプロモーター領域の不活化により、腫瘍形成の原因となっていることが報告されているSTART-GAP(START domain-containing Rho GTPase-activating protein、別名 DLC: deleted in liver cancer)ファミリー遺伝子産物の3種類のアイソフォームのうち、START-GAP1/DLC1について、(1)細胞内局在化調節機構を解析し、このタンパク質の細胞内分布と生理機能との関係を解明する。( 2)機能ドメインであるSTARTドメイン、および、GAPドメイン、ならびに、全長タンパク質の大量発現系と精製系を確立し、タンパク質結晶化とX線結晶構造解析を行うことによって、その構造を明らかにすることを目的とする。その結果に基づき、冠攣縮性狭心症 (CSA) の原因解明を目指す。というのが本年度の目標であった。このうち前者については、HeLa細胞において、EGF刺激で一過性のSTART-GAP1のリン酸化亢進がおこることをかを確認した。また、PP2以外のリン酸化阻害剤をいくつかスクリーニングしたが、focal adhesion kinase (FAK)阻害剤で同様の影響が見られることが示された。(2)については目的の機能ドメインに対応するSTART-GAP1のGST-融合発現系を構築し、これらを用いて、正常型およびCSAの組換えタンパクをいずれもmg単位で得ることができた。しかし、いずれも精製に困難をともなっており、結晶化スクリーニングの段階に至っていない。また関連研究としてSTART-GAP1に結合して活性化し、細胞の運動機構に関与していると思われる新規ホスホリパーゼCをクローニングした。

启动差距的三种同工型（含有启动域的Rho GTPase激活蛋白（也称为DLC）家族基因产物，据报道，这是造成基因缺失和启动子缺失引起的肿瘤形成的原因，我们将分析该蛋白质局限性的机制，并分析了该蛋白质效果的机制，并分析（功能结构域的大规模表达和纯化系统启动域，全长蛋白质，并通过进行蛋白质结晶和X射线晶体结构分析来阐明其结构。筛选了Hela细胞中的Start-GAP1磷酸化，其他几种磷酸化抑制剂被筛选，并且显示出类似的效果，可见焦点粘附激酶（FAK）抑制剂。对于（2），构建了与感兴趣的功能域相对应的start-GAP1的GST融合表达系统，并在MG单位中获得了正常和CSA重组蛋白的使用。但是，这两者在净化方面都有困难，并且尚未达到结晶筛选的阶段。在一项相关研究中，我们克隆了一种结合起始GAP1并激活它的新型磷脂酶C，并且似乎参与了细胞运动机制。

项目成果

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The START-GAP/DLC family: antioncogene products that act as RhoGAPs and activators of phospholipase C

START-GAP/DLC 家族：充当 RhoGAP 和磷脂酶 C 激活剂的抑癌基因产品

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yagisawa;H
通讯作者：
H

Interaction between START-GAP/DLC ; a family of novel antioncogene products, and tensin, a component of a focal adhesion complex

START-GAP/DLC之间的交互；

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
H Yagisawa;et al.
通讯作者：
et al.

Characterization of the START domain of p122RhoGAP/START-GAP/DLC-1

p122RhoGAP/START-GAP/DLC-1 START 结构域的表征

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
YAGISAWA;H;BANIK;G;YAMAGA;M
通讯作者：
M

Measurement of inositol polyphosphates by ion chromatography and their physiological status in higher plant

离子色谱法测定高等植物中肌醇多磷酸及其生理状态

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
T Mimura;et al.;H Yagisawa
通讯作者：
H Yagisawa

DGKζ is degraded through the cytoplasmic ubiquitin-proteasome system under excitotoxic conditions, which causes neuronal apoptosis because of aberrant cell cycle reentry

DGK z 在兴奋性毒性条件下通过细胞质泛素-蛋白酶体系统降解，由于异常的细胞周期折返而导致神经元凋亡

DOI：
10.1016/j.cellsig.2012.03.021
发表时间：
2012
期刊：
Cell Signal
影响因子：
4.8
作者：
Okada M;Hozumi Y;Tanaka T;Suzuki Y;Yanagida M;Araki Y;Evangelisti C;Yagisawa H;Topham MK;Martelli AM;Goto K.
通讯作者：
Goto K.