抗がん遺伝子産物ＳＴＡＲＴ－ＧＡＰ／ＤＬＣファミリータンパク質の細胞内局在化機構

抗癌基因产物START-GAP/DLC家族蛋白的细胞内定位机制

基本信息

批准号：
22501016
负责人：
八木澤仁
金额：
$ 2.75万
依托单位：
University of Hyogo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010-04-01 至 2013-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

遺伝子の欠失やプロモーター領域の不活化により、腫瘍形成の原因となっていることが報告されているSTART-GAP(START domain-containing Rho GTPase-activating protein、別名 DLC: deleted in liver cancer)ファミリー遺伝子産物の3種類のアイソフォームのうち、START-GAP1/DLC1について、(1)細胞内局在化調節機構を解析し、このタンパク質の細胞内分布と生理機能との関係を解明する。( 2)機能ドメインであるSTARTドメイン、および、GAPドメイン、ならびに、全長タンパク質の大量発現系と精製系を確立し、タンパク質結晶化とX線結晶構造解析を行うことによって、その構造を明らかにすることを目的とする。その結果に基づき、冠攣縮性狭心症 (CSA) の原因解明を目指す。というのが本年度の目標であった。このうち前者については、HeLa細胞において、EGF刺激で一過性のSTART-GAP1のリン酸化亢進がおこることをかを確認した。また、PP2以外のリン酸化阻害剤をいくつかスクリーニングしたが、focal adhesion kinase (FAK)阻害剤で同様の影響が見られることが示された。(2)については目的の機能ドメインに対応するSTART-GAP1のGST-融合発現系を構築し、これらを用いて、正常型およびCSAの組換えタンパクをいずれもmg単位で得ることができた。しかし、いずれも精製に困難をともなっており、結晶化スクリーニングの段階に至っていない。また関連研究としてSTART-GAP1に結合して活性化し、細胞の運動機構に関与していると思われる新規ホスホリパーゼCをクローニングした。

START-GAP（含START结构域的Rho GTP酶激活蛋白，也称为DLC：在肝癌中缺失）家族基因，据报道，该家族基因由于启动子区域的基因缺失或失活而导致肿瘤形成。产品，START-GAP1/DLC1：（1）分析细胞内定位调控机制，阐明该蛋白的细胞内分布与生理功能的关系。 (2)建立功能域START结构域和GAP结构域以及全长蛋白的大规模表达和纯化系统，并通过进行蛋白结晶和X射线晶体结构分析来阐明其结构。根据这些结果，我们的目标是阐明冠状动脉痉挛性心绞痛（CSA）的原因。这是今年的目标。对于前者，我们证实 EGF 刺激导致 HeLa 细胞中 START-GAP1 短暂过度磷酸化。我们还筛选了除 PP2 之外的几种磷酸化抑制剂，结果表明粘着斑激酶 (FAK) 抑制剂也具有类似的效果。关于(2)，我们构建了与所需功能域相对应的START-GAP1的GST融合表达系统，并且使用该系统，我们能够获得以mg为单位的正常蛋白和CSA重组蛋白。但均难以纯化，尚未达到结晶筛选阶段。在相关研究中，我们克隆了一种新型磷脂酶C，它结合并激活START-GAP1，被认为参与细胞运动机制。

项目成果

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The START-GAP/DLC family: antioncogene products that act as RhoGAPs and activators of phospholipase C

START-GAP/DLC 家族：充当 RhoGAP 和磷脂酶 C 激活剂的抑癌基因产品

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yagisawa;H
通讯作者：
H

Interaction between START-GAP/DLC ; a family of novel antioncogene products, and tensin, a component of a focal adhesion complex

START-GAP/DLC之间的交互；

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
H Yagisawa;et al.
通讯作者：
et al.

Characterization of the START domain of p122RhoGAP/START-GAP/DLC-1

p122RhoGAP/START-GAP/DLC-1 START 结构域的表征

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
YAGISAWA;H;BANIK;G;YAMAGA;M
通讯作者：
M

Measurement of inositol polyphosphates by ion chromatography and their physiological status in higher plant

离子色谱法测定高等植物中肌醇多磷酸及其生理状态

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
影响因子：
0
作者：
T Mimura;et al.;H Yagisawa
通讯作者：
H Yagisawa

DGKζ is degraded through the cytoplasmic ubiquitin-proteasome system under excitotoxic conditions, which causes neuronal apoptosis because of aberrant cell cycle reentry

DGK z 在兴奋性毒性条件下通过细胞质泛素-蛋白酶体系统降解，由于异常的细胞周期折返而导致神经元凋亡

DOI：
10.1016/j.cellsig.2012.03.021
发表时间：
2012
期刊：
Cell Signal
影响因子：
4.8
作者：
Okada M;Hozumi Y;Tanaka T;Suzuki Y;Yanagida M;Araki Y;Evangelisti C;Yagisawa H;Topham MK;Martelli AM;Goto K.
通讯作者：
Goto K.