高血圧自然発症ラット(SHR)における高血圧発症機構の分子生物学解析

自发性高血压大鼠（SHR）高血压发生机制的分子生物学分析

基本信息

批准号：
04260103
负责人：
八木澤仁
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Himeji Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は少数の遺伝子の異常が本態性高血圧症の遺伝子的素因を構成しているという作業仮説を立て、高血圧自然発症ラット(SHR)を使用して主に細胞内情報伝達に関わるタンパクの遺伝子の構造について正常ラットとの異同を調べてきた。一昨年、SHRのホスホリパーゼC(PLC)のδ1アイソフォームにアミノ酸置換を伴う遺伝子変異が存在することを報告したことに基づき本年度は以下の研究を行った。変異部を含む部分ペプチドを合成しNMRを用いた予備的実験を行ったところ、SHR型ペプチドは正常型ペプチドと比べて疎水性が高く、正常型ペプチドから得られるβ構造由来の信号が見られなかった。遺伝子から推定される立体構造変化が実際の分子を反映している可能性が高い。また、PCR-RFLP法による遺伝子連鎖解析により、PLCδ1のSHR型の遺伝子型が血圧とは緩い逆相関を示すことを報告し、このアレルが血圧上昇に対して抑制的に作用している可能性を示した。最近PLCのδ型アイソフォームが細胞内Ca^<2+>動員2次伝達物質であるIP_3と結合することが示され、このアイソフォームの細胞内Ca^<2+>調節機構における役割に興味が持たれ始めているが、大腸菌で発現させたPLCδ1もIP_3結合活性を示した。現在SHR由来のcDNA発現産物と正常ラット型発現産物のPLC酸素活性ならびにIP_3結合活性を詳細に比較検討中である。また発現産物を用いてモノクローナル抗体を作製した。また我々はPLCδ1の遺伝子座がIP_3受容体と同じ第8染色体に位置することを決定した。さらにPLCδ1と相同性をもつ遺伝子が、酵母の増殖において重要な役割を果たし、ラットの遺伝子が酵母の遺伝子に代わり得ることを明らかにした(東大理・植物との共同研究)。今後我々は、血管内皮・平滑筋細胞にPLCδ1の遺伝子あるいはそのアンチセンスを導入し、その影響を調べる予定であるが、これに関して細胞膜膜融合性ペプチドを用いた標的細胞への効率的な遺伝子導入法を開発した。

我们假设少数基因的异常构成了原发性高血压的遗传倾向，并使用自发性高血压大鼠（SHR），我们研究了主要参与细胞内信号转导的蛋白质的基因，我们调查了其结构是否与其他蛋白质不同。正常老鼠。根据两年前报道的SHR磷脂酶C（PLC）的δ1亚型存在与氨基酸取代相关的基因突变的报告，我们今年进行了以下研究。当我们合成含有突变区域的部分肽并使用NMR进行初步实验时，我们发现SHR型肽比正常型肽更疏水，并且观察到来自正常型肽获得的β结构的信号。没有。从基因推断的构象变化很可能反映了实际的分子。此外，通过PCR-RFLP方法的遗传连锁分析，我们发现PLCδ1的SHR基因型与血压呈弱负相关，表明该等位基因可能对血压升高具有抑制作用。最近，研究表明 PLC 的 δ 型同工型与细胞内 Ca^2+ 动员的二级递质 IP_3 结合，我们对这种同工型在细胞内 Ca^2+ 动员中的作用感兴趣。然而，大肠杆菌中表达的PLCδ1也表现出IP_3结合活性。我们目前正在对SHR衍生的cDNA表达产物和正常大鼠型表达产物的PLC氧活性和IP_3结合活性进行详细的比较研究。还使用表达产物生产单克隆抗体。我们还确定PLCδ1的位点位于8号染色体上，与IP_3受体相同。此外，还发现与PLCδ1同源的基因在酵母生长中发挥着重要作用，并且大鼠基因可以替代酵母基因（与东京大学理科和植物科学系的联合研究）。未来，我们计划将PLCδ1基因或其反义基因引入血管内皮/平滑肌细胞并研究其作用规律。