高血圧自然発症ラット(SHR)における高血圧発症機構の分子生物学解析

自发性高血压大鼠（SHR）高血压发生机制的分子生物学分析

基本信息

批准号：
04260103
负责人：
八木澤仁
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Himeji Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は少数の遺伝子の異常が本態性高血圧症の遺伝子的素因を構成しているという作業仮説を立て、高血圧自然発症ラット(SHR)を使用して主に細胞内情報伝達に関わるタンパクの遺伝子の構造について正常ラットとの異同を調べてきた。一昨年、SHRのホスホリパーゼC(PLC)のδ1アイソフォームにアミノ酸置換を伴う遺伝子変異が存在することを報告したことに基づき本年度は以下の研究を行った。変異部を含む部分ペプチドを合成しNMRを用いた予備的実験を行ったところ、SHR型ペプチドは正常型ペプチドと比べて疎水性が高く、正常型ペプチドから得られるβ構造由来の信号が見られなかった。遺伝子から推定される立体構造変化が実際の分子を反映している可能性が高い。また、PCR-RFLP法による遺伝子連鎖解析により、PLCδ1のSHR型の遺伝子型が血圧とは緩い逆相関を示すことを報告し、このアレルが血圧上昇に対して抑制的に作用している可能性を示した。最近PLCのδ型アイソフォームが細胞内Ca^<2+>動員2次伝達物質であるIP_3と結合することが示され、このアイソフォームの細胞内Ca^<2+>調節機構における役割に興味が持たれ始めているが、大腸菌で発現させたPLCδ1もIP_3結合活性を示した。現在SHR由来のcDNA発現産物と正常ラット型発現産物のPLC酸素活性ならびにIP_3結合活性を詳細に比較検討中である。また発現産物を用いてモノクローナル抗体を作製した。また我々はPLCδ1の遺伝子座がIP_3受容体と同じ第8染色体に位置することを決定した。さらにPLCδ1と相同性をもつ遺伝子が、酵母の増殖において重要な役割を果たし、ラットの遺伝子が酵母の遺伝子に代わり得ることを明らかにした(東大理・植物との共同研究)。今後我々は、血管内皮・平滑筋細胞にPLCδ1の遺伝子あるいはそのアンチセンスを導入し、その影響を調べる予定であるが、これに関して細胞膜膜融合性ペプチドを用いた標的細胞への効率的な遺伝子導入法を開発した。

我们已经做出了一个可行的假设：少数遗传异常构成了基本高血压的遗传易感性，并使用自发性高血压大鼠（SHR）来研究主要与正常大鼠有关细胞内信号的蛋白质基因结构之间的差异。今年进行了以下研究，该研究是根据两年前在Δ1同工型中与氨基酸取代的SHR磷脂酶C（PLC）的基因突变。当合成含有突变区域的部分肽并使用NMR进行初步实验时，SHR型肽比正常肽更疏水，并且没有从正常肽中获得的β结构得出的信号。从基因推导出的构象变化可能反映了实际分子。此外，使用PCR-RFLP方法的基因链接分析报告说，PLCΔ1的SHR型基因型与血压表现出轻度的逆相关性，表明该等位基因可能对血压升高产生抑制作用。最近，已经表明，PLC的δ型同工型与IP_3结合，次级细胞内Ca^<2+>募集剂，以及该同工型在细胞内Ca^<2+>调节机制中的作用也变得越来越有趣，但是在E. coli中表现出的PLCδ也表现出了E. coli也表现出了iP_3-3-lingins Active active Action。目前，正在详细比较源自SHR和正常大鼠表达产物的cDNA表达产物的PLC氧活性和IP_3结合活性。另外，使用表达产物制备单克隆抗体。我们还确定PLCΔ1基因座位于与IP_3受体的同一染色体上。此外，已经揭示了与PLCΔ1同源的基因在酵母生长中起重要作用，并且大鼠基因可以替代酵母基因（与东京大学和植物的协作研究）。我们计划将PLCδ1基因或反义引入血管内皮和平滑肌细胞，并研究该基因的作用，并开发了一种有效的方法，可以使用细胞膜融合肽将基因转染到靶细胞中。