膜と細胞骨格の制御因子としてのホスホイノシチド特異的ホスホリパーゼCのマシナリー

磷酸肌醇特异性磷脂酶 C 作为膜和细胞骨架调节剂的机制

• 批准号: 13033035
• 负责人: 八木澤 仁
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Himeji Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13033035/
• 关键词: ホスホリパーゼC; アメーバ運動; カベオラ; 細胞骨格; イノシトールシグナリング; PHドメイン; マイクロインジェクション; 固体高分解能NMR; 自由生活アメーバ; アクチン線維; 単離膜モデル; 原子間力顕微鏡; イノシトールリン脂質結合タンパク

膜と細胞骨格の制御因子として注目を集めているδ型ホスホリパーゼC(PLCδ1)の活性化と、それにともなう膜直下構造の変化について解析した。1.自由生活アメーバA. proteusの細胞運動に関わるホスホイノシチドシグナリングについて、原子間顕微鏡と近接場顕微鏡による細胞膜ルーメンの観察、蛍光性PtdIns(4,5)P2やIns(1,4,5)P3の細胞内へのマイクロインジェクションにより、以下の点を明らかにした。アメーバは仮足を伸長させることにより貪食と移動を行うが、この細胞運動では,仮足先端のPtdIns(4,5)P2がホスホリパーゼC(PLC)により分解されることが重要であり、仮足伸張は、PtdIns(4,5)P2を介して膜に結合していたアクチン繊維の解離によって惹起され、産生されたIns(1,4,5)P3によるCa^<2+>動員を介したPLC活性化の正のフィードバックにより維持される。2.PtdIns(4,5)P2とPLCδ1との結合にクリティカルであるプレクストリンホモロジー(PH)ドメインとの相互作用を固体NMRにより解析した。脂質ベジクル結合によってPLCδ1-PHの局所立体構造は変化し、ドメイン側方にあるαヘリックスが脂質の疎水的な環境により親和性をもつことが判明した。3.PLCδ1結合タンパク質p122RhoGAPが、細胞膜マイクロドメインのひとつであるカベオラに存在することを明らかにした。その局在には、p122RhoGAPのSTARTドメインがコレステロールと結合すること、またおそらくGAPドメインがカベオリン1と相互作用することが重要である。

我们分析了δ型磷脂酶C（PLCΔ1）的激活，该磷脂酶C（PLCΔ1）吸引了作为膜和细胞骨架的调节剂的注意力，以及直接在膜下方的结构变化。 1。关于在自由生活的变形虫a的细胞运动中涉及的磷酸肌醇信号，通过使用原子和近场显微镜观察细胞膜腔，以及对荧光PTDINS（4,5）P2和INS（1,4,4,5,5）P3进入细胞的荧光膜管道来阐明以下几点。变形虫通过扩展伪烟的吞噬和迁移，但是在这种细胞运动中，重要的是，ptdins（4,5）p2 pseudopoop尖端被磷脂酶C（plc）降解，并通过阳离子纤维纤维的脉冲及以质量纤维的离职（4,4,4,4,4,4,422）（PSEUDOPASE C（PLC）的范围来诱导actipin fibers and iS plc and prc and prc and prc and ptdds ptdds（4,4,4,5）。通过产生的INS（1,4,5）P3通过CA^<2+>激活。 2。通过固态NMR分析了PTDINS（4,5）P2和PLCΔ1与Plextrin同源（PH）结构域之间的相互作用，这对于结合至关重要。 PLCΔ1-PH的局部构象通过脂质囊泡结合改变，发现域侧的α-螺旋在脂质的疏水环境中具有亲和力。 3。我们已经揭示了PLCδ1结合蛋白P122RHOGAP存在于Caveolae（细胞膜微区之一）中。重要的是，重要的是，P122RHOGAP的起始结构域结合胆固醇，并且GAP结构域可能与小窝蛋白1相互作用。

项目成果

Okada M et al.: "Carboxyl-terminal basic amino acids in the X domain are essential for the nuclear import of phospholipase C deltal"Genes Cells. 7(9). 985-996 (2002)

Okada M 等人：“X 结构域中的羧基末端碱性氨基酸对于磷脂酶 C deltatal 的核输入至关重要”Genes Cells。

Kawakatsu T.et al.: "Interaction of actin filaments with the plasma membrane in Amoeba proteus"Cell Structure and Function. 26(in press). (2001)

Kawakatsu T.等人：“变形虫中肌动蛋白丝与质膜的相互作用”细胞结构和功能。

Yagisawa H et al.: "Regulation of the intracellular localization of phosphoinositide-specific phospholipase C deltal"Adv. Enzyme Regl. 42. 261-284 (2002)

Yagisawa H 等人：“磷酸肌醇特异性磷脂酶 C delta 细胞内定位的调节”Adv.

Akahane S.et al.: "A novel neutral amino acid transporter from the hyperthermophilic archaeon Thermococcus sp. KS-1"J.Biochem.. (印刷中). (2003)

Akahane S. 等人：“来自超嗜热古菌 Thermococcus sp. KS-1 的新型中性氨基酸转运蛋白”J.Biochem..（印刷中）。

Kamata K.et al.: "Cycloprodigiosin hydrochloride suppress tumor necros is factor(TNF)alpha-induced transcriptional activation by NF-KB"FEBS Lett.. 507(1). 74-80 (2001)

Kamata K.等人：“盐酸环菌红抑制肿瘤坏死是由 NF-KB 因子 (TNF)α 诱导的转录激活”FEBS Lett.. 507(1)。