レクチン受容体による生体の危機管理機構の解明

凝集素受体阐明生物危机管理机制

基本信息

批准号：
21679003
负责人：
山崎晶
金额：
$ 25.46万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (S)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2013
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21679003/
关键词：
C型レクチン免疫受容体マクロファージ死細胞炎症組織修復

项目摘要

これまで、C型レクチン受容体Mincleが病原性真菌、マラセチアを認識することを見出している。マラセチア真菌は新生児における致死性真菌症の原因菌としても知られており、そのリガンドの同定は重要な課題である。一方、Mincleのリガンドとして、結核菌の細胞壁に存在する糖脂質、トレハロースジミコレート(trehalose dimycolate ; TDM)を昨年同定している。そこで、糖脂質に注目し、様々な溶媒を用いて、マラセチア真菌中に含まれるMincleリガンドの精製、同定を試みた。まず、マラセチア真菌を様々な溶媒で処理し、処理後の菌体のリガンド活性をレポーター細胞を用いて調べたところ、クロロフォルム:メタノール処理で活性は完全に消失し、親水性溶媒処理では影響を受けないことが判明した。このことから、リガンドは脂溶性分子である可能性が示唆された。実際、クロロフォルム:メタノールに抽出されてきた画分をプレートにコートして刺激すると、Mincle発現細胞が強く活性化されることも判明した。この画分を薄層クロマトグラフィー(TLC)で展開したところ、TDMと完全に一致する挙動を示すスポットは検出されなかったことから、TDMとは異なる未知のリガンドを含んでいることが示唆された。そこで、シリカカラムを作成して溶媒の比率を変化させながら分画を進めたところ、両親媒性画分に強い活性を得た。その生化学性質はTDMとは全く異なっており、全く新しい構造のリガンドである可能性が高い。以上の結果より、マラセチア真菌には、Mincleに対する強いリガンド活性を有する新規脂質が存在することが示唆された。

到目前为止，我们发现C型凝集素受体Mincle识别出致病的真菌Malassezia。马拉西亚真菌也被称为新生儿致命霉菌病的致病细菌，其配体的鉴定是一个重要问题。另一方面，去年，在结核分枝杆菌细胞壁中发现的糖二酸（TDM）被确定为Mincle的配体。因此，我们专注于糖脂，并试图使用各种溶剂净化和识别Malassezia Fungi中包含的Mincle配体。首先，用各种溶剂处理了马拉西亚真菌，并使用报告细胞检查了处理过的细胞的配体活性，发现该活性在氯仿治疗后完全消失：甲醇处理，并且没有影响亲水性溶剂治疗。这表明配体可以是脂溶性分子。实际上，还发现，当板涂有板并用氯仿提取的馏分刺激时：甲醇，表达明确的细胞被强烈激活。当通过薄层色谱（TLC）开发此部分时，没有检测到与TDM完全一致行为的斑点，这表明它包含与TDM不同的未知配体。因此，制备了一个二氧化硅柱，并在改变溶剂之比时进行了分馏，并在两亲性分数中获得了强大的活性。它的生化特性与TDM的生化特性完全不同，并且可能是具有全新结构的配体。以上结果表明，玛拉西氏菌真菌具有一种新型的脂质，具有强烈的配体活性对小脂肪。