肺癌特異的αβT細胞受容体遺伝子を導入したγδT細胞を用いた肺癌のCTL治療

使用引入肺癌特异性αβT细胞受体基因的γδT细胞对肺癌进行CTL治疗

• 批准号: 21659327
• 负责人: 深見 武史
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659327/
• 关键词: 肺癌; αβT細胞受容体; 遺伝子導入; CTL; γδT細胞; 免疫細胞治療

免疫療法は新たな治療法のひとつとして期待されているが、現状では十分な効果を得るには至っていない。肺癌患者において、腫瘍抗原に対するアビディティの高いCTLを樹立することは非常に困難であることが知られている。アビディティの高いCTLからTCR遺伝子をクローニングして、レトロウイルスベクターを用いて患者の末梢血のリンパ球に導入して腫瘍特異的CTLを作製し、細胞移入治療を実現することを目的として本研究を実施した。肺癌患者の腫瘍組織から肺癌細胞株F1121Lを樹立し、手術時に採取・凍結保存していた自己のリンパ節リンパ球と共培養を繰り返すことにより癌精巣抗原であるKK-LC1をHLA-B15拘束性に認識するCTLクローンH1/10を樹立した。TCRα鎖およびβ鎖をクローニングし、翻訳効率の高いlinkerである2AでTCRα鎖(Vα1)とTCRβ鎖(Vβ19)をつなぎ、PHXレトロウイルスベクターに組み込んだ。末梢血からPBMCを採取しゾレドロン酸とIL-2で刺激してγδT細胞を増殖させ、これに上記TCRαβ遺伝子のみを導入した。KK-LC1陽性のF1121LおよびをKK-LC1ペプチドをパルスしたF1121-EB-virus transformed B cellに特異的に傷害活性とサイトカイン産生を示し、この反応は抗MHC class I抗体添加により阻害された。さらにSCID mouseを用いて、TCRαβ-CD8移入γδT細胞の養子免疫モデルを作成し、抗原特異的なin vivoでの腫瘍増殖抑制効果が得られた。肺癌患者末梢血からPBMCを採取し、5μMのゾレドロン酸と1000IU/mlのIL-2を用いてγδT細胞を培養し、15名の肺癌患者にγδT細胞移入治療を実施した。この研究成果をもとに、今後肺癌特異的CTL由来のTCRを患者末梢血γδT細胞に導入し、肺癌に対する細胞治療法を開発する。

预计免疫疗法将是一种新疗法之一，但目前尚未获得足够的结果。众所周知，在肺癌患者中，与肿瘤抗原相比较高的CTL非常困难。进行这项研究的目的是将TCR基因从高度流行的CTL克隆，然后使用逆转录病毒载体转染患者的外周血中的淋巴细胞，以产生肿瘤特异性的CTL，并实现细胞转移治疗。肺癌细胞系F1121L是从肺癌患者的肿瘤组织中建立的，并通过与自己的淋巴结淋巴结淋巴细胞反复共培养，该淋巴结淋巴细胞在手术过程中收集并保存了冷冻，我们建立了CTL克隆H1/10，限制了癌症抗癌症的抗癌症抗药性KKK-LC-LC15。克隆TCRα和β链，并使用2A（Vα1）和TCRβ链（Vβ19）使用2A（具有高平移效率的连接器）连接，并将其掺入PHX逆转录病毒载体中。从外周血收集PBMC，并用唑来膦酸和IL-2刺激以增殖γδT细胞，并将上面的TCRαβ基因引入其中。 KK-LC1阳性F1121L和F1121-EB-病毒病毒转化为KK-LC1肽脉动的B细胞显示特异性损伤活性和细胞因子的产生，并且通过添加抗MHC I类抗体抑制了该反应。此外，使用SCID小鼠，我们创建了TCRαβ-CD8转移的γδT细胞的收养免疫模型，并获得了体内肿瘤生长的抗原特异性抑制作用。从肺癌患者的外周血中收集PBMC，使用5μM唑来膦酸和1000 IU/ml IL-2培养γδT细胞，并对15例肺癌患者进行γδT细胞转移治疗。基于这项研究，我们将在患者外周血γδT细胞中引入肺癌特异性CTL衍生的TCR，以开发肺癌的细胞疗法。

项目成果

肺癌における細胞傷害性T細胞が認識する腫瘍抗原の同定

肺癌中细胞毒性 T 细胞识别的肿瘤抗原的鉴定

• 发表时间: 2009
• 作者: Sato;K.;花桐武志;花桐武志;Yasumoto K;花桐武志;作田和子;吉田幸弘;垣見和宏;佐藤啓介;重松義紀;安元公正;竹之山光広;竹之山光広
• 通讯作者: 竹之山光広

Clinical significance of cancer/testis antigens expression in patients with non-small cell lung cancer

• DOI: 10.1016/j.lungcan.2009.05.010
• 发表时间: 2010-04-01
• 期刊: LUNG CANCER
• 影响因子: 5.3
• 作者: Shigematsu, Yoshiki;Hanagiri, Takeshi;Yasumoto, Kosei
• 通讯作者: Yasumoto, Kosei

肺癌患者の腫瘍特異的免疫応答の解析と免疫療法の構築

肺癌患者肿瘤特异性免疫反应分析及免疫治疗进展

• 发表时间: 2009
• 作者: Sato;K.;花桐武志;花桐武志;Yasumoto K;花桐武志;作田和子;吉田幸弘;垣見和宏;佐藤啓介;重松義紀;安元公正;竹之山光広;竹之山光広;重松義紀;竹之山光広
• 通讯作者: 竹之山光広

Lung cancer-associated tumor antigens and the present status of immunotherapy against non-small-cell lung cancer

• DOI: 10.1007/s11748-008-0433-6
• 发表时间: 2009-09
• 期刊: General Thoracic and Cardiovascular Surgery
• 影响因子: 1.2
• 作者: K. Yasumoto;T. Hanagiri;M. Takenoyama

腫瘍抗原特異的T細胞受容体(TCR)遺伝子移入による抗腫瘍エフェクター細胞の誘導(第2報)

通过肿瘤抗原特异性T细胞受体（TCR）基因转移诱导抗肿瘤效应细胞（第二次报告）

• 发表时间: 2009
• 作者: Li H;Wang B;Wang Z;Guo Q;Tabuchi K;Hammer RE;Sudhof TC;Zheng H;竹之山光広,重松義紀,塩田広宣,黒田耕志,馬場哲郎,市来嘉伸,花桐武志,安元公正
• 通讯作者: 竹之山光広,重松義紀,塩田広宣,黒田耕志,馬場哲郎,市来嘉伸,花桐武志,安元公正