炭酸アパタイトナノテクノロジーによる難治性固形癌の治療法の開発

利用碳酸盐磷灰石纳米技术开发难治性实体瘤的治疗方法

基本信息

批准号：
21659304
负责人：
山本浩文
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659304/
关键词：
炭酸アパタイトナノテクノロジー DDS

项目摘要

炭酸アパタイト法により抗癌剤、siRNAを封入し大腸癌細胞へのデリバリーを試みた。1.薬物のデリバリーとしてはシスプラチン、アドリアマイシンが電荷の関係上、効率的に炭酸アパタイトへの封入が可能であった。電子顕微鏡で粒子サイズを測定すると60-80nmの粒子が数個集まり200nm程度のサイズとなっていた。通常、腫瘍血管のサイズは～700nm程度であるので癌組織での受動運搬には適したサイズである。この粒子はpH5.8-6.0で破壊され、癌細胞のエンドソームにおいては同程度の酸性pH環境であるため、速やかにバーストするものと推察される。アドリアマイシンの発する蛍光を利用して癌細胞への取り込みを追跡すると、炭酸アパタイトに封入することで、短時間で細胞内に侵入することができることが分かった。動物に投与するために少量の溶媒にアドリアマイシン封入炭酸アパタイトをloadする際に、ナノ粒子の重合が起き、そのままでは血管内への投与は困難であった。そこでアルブミンやトランスフェリンなどの重合阻害作用をもつ物質を添加することで重合を回避する方法を試した。(現在,In vitro実験の部分を論文を投稿中)2.炭酸アパタイトにFITC標識したsiRNAを封入し細胞内への取り込みを追跡した。リポフェクション法よりも早くに細胞内に入り、survivinなどの蛋白発現を速いタイミングでノックアウトすることができた。ヌードマウスの尾静脈に投与すると肝臓や腎臓などへの取り込みはFITC標識siRNA単体の方が多く、皮下腫瘍への取り込みは炭酸アパタイトに封入したFITC標識siRNAが多くみられた。このことは、サイズコントロールされた炭酸アパタイト体は正常の腫瘍血管からは漏出しにくく、腫瘍血管選択的に漏出することを示唆し、炭酸アパタイトによるsiRNAのDDSは腫瘍の標的化に適していることを示した。(動物実験をリピートし論文作成予定)

抗癌剂和siRNA通过磷酸磷酸盐法封装，以输送结肠癌细胞。 1。由于涉及的指控，顺铂和阿霉素能够有效地封装在碳酸盐磷灰石中作为药物递送。当使用电子显微镜测量粒径时，收集了几个60-80 nm的颗粒，导致约200 nm的大小。肿瘤血管的大小约为700 nm，使其适合于癌症组织中的被动运输。该粒子在pH 5.8-6.0处被破坏，并且估计会迅速破裂，因为它在癌细胞内体中相同的酸性pH环境中。通过使用阿霉素发出的荧光，发现通过封装磷灰石碳酸盐，可以在短时间内侵入细胞。当将adrimycin封装的碳酸盐磷灰石加载到少量溶剂中以用于动物时，会发生纳米颗粒的聚合，因此很难像原样的血管内进行血管内治疗。因此，我们尝试通过添加具有聚合抑制作用（例如白蛋白和转铁蛋白）的物质来避免聚合的方法。（目前，我在体外实验的一部分提交了一篇论文）2。用FITC标记的siRNA封装了碳酸盐磷灰石，并跟踪了其对细胞的摄取。它能够早于LiPofection方法进入细胞，并且可以在更快的时机下将蛋白质（例如survivin）的表达击倒。当给裸小鼠的尾静脉施用时，FITC标记的siRNA在肝脏，肾脏等中更为常见，而FITC标记的siRNA在肝脏，肾脏和皮下肿瘤中更为常见，在FITC标记的siRNA中更为常见。这表明，尺寸控制的碳酸盐磷灰石体不太可能从正常肿瘤血管中泄漏并从肿瘤血管中有选择性泄漏，这表明碳酸盐磷灰石的DDS适用于肿瘤靶向。（重复动物实验并准备纸）