部位特異的in vivo光架橋実験によるSecトランスロコンの網羅的相互作用解析

使用位点特异性体内光交联实验对 Sec 易位子进行全面的相互作用分析

基本信息

批准号：
21657049
负责人：
森博幸
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21657049/
关键词：
SecYEG SecA ATPase SecDF in vivo光架橋 YfgM translocon in vivo光架橋実験 SecG トランスロコンタンパク質膜透過 SecA ATPse pベンゾフェニルアラニンアンバーサプレッションアジ化ナトリウム

项目摘要

バクテリアのタンパク質膜透過に関与するSec translocon成因子間の相互作用を網羅的に解析する事を目的として、これら構成因子をターゲットとしたin vivo光架橋実験を進めた。この手法は、生きた細胞内でのタンパク質間の一時的かつ機能的な相互作用をモニター出来る画期的な系として最近多くの成果が報告されつつある。我々はこれまでに、本手法を用いて、モータ因子SecAと膜透過チャネルSecY間の詳細な相互作用を明らかにすると共に、SecGを対象とした解析から、新規膜タンパク質YfgMの存在を見いだしている。本年は、タンパク質膜透過能の昂進に関与するSecDFに着目し、最近等研究室により明らかとなった立体構造情報に基づいて、SecDFの分子表面に位置するアミノ酸残基を光反応性のアミノ酸アナログパラベンゾイルフェニルアラニン(pBPA)に改変した変異型SecDFタンパク質を作製して網羅的な解析を進めている。これまでの所、SecDの6番目の膜貫通領域内にpBPAを導入した際に特異的な架橋複合体が形成できる事を確認している。現在、架橋相手の同定を進めている。

为了全面分析细菌蛋白质膜渗透的SEC转运因子之间的相互作用，我们进行了针对这些组成因子的体内光叠链接链接实验。最近，该技术是一种开创性的系统，可以监测活细胞内蛋白质之间的时间和功能相互作用。我们已经使用了这项技术来阐明运动因子SECA和膜渗透通道Secy之间的详细相互作用，并通过靶向SECG的分析发现了新型膜蛋白YFGM的存在。 This year, we focused on SecDF, which is involved in improving protein membrane permeability, and based on the three-dimensional structure information revealed in recent laboratory, we are creating a mutated SecDF protein in which amino acid residues located on the surface of SecDF molecules are modified to the photoreactive amino acid analog parabenzoylphenylalanine (pBPA), and conducting comprehensive analysis.到目前为止，已经证实，当将PBPA引入SECD的第六个跨膜区域时，可以形成特定的交联络合物。目前，我们正在努力确定交联伙伴。