骨芽細胞・軟骨細胞制御因子Runx2を調節する化合物のスクリーニング系の開発

开发调节成骨细胞/软骨细胞调节因子 Runx2 的化合物筛选系统

• 批准号: 20659233
• 负责人: 小守 壽文
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20659233/
• 关键词: Runx2; トランスジェニックマウス; GFP; 骨芽細胞; 軟骨細胞; 骨粗鬆症; 変形性関節症; プロモーター; 器官培養; 骨形成

Runx2は、骨芽細胞・軟骨細胞分化に重要な役割を果たしている。そして、Runx2の時間的・空間的発現および活性制御が、骨芽細胞・軟骨細胞分化および骨格形成・維持プログラムに必須である。EGFPとDsRedによりRunx2の発現と活性を同時に観察できるトランスジェニックマウスを作製し、その中足骨を用いた器官培養により、Runx2の発現と活性を調節できる化合物のスクリーニング系を確立することを目的とした。本年度は、異なるRunx2プロモーター領域を含むRunx2プロモーター・EGFPトランスジェニックマウスを7系統樹立した。それぞれの系統でのEGFP発現を、GFP抗体を用いた免疫組織染色で調べた。胎生16.5日、1週齢、4週齢で、骨芽細胞、軟骨細胞おける発現パターンを検討、骨芽細胞、軟骨細胞におけるRunx2発現誘導を検討するのに適した系統を決めた。これらの系統の中足骨器官培養を用いて、FGF2、FGF18、BMP-2、nogginの効果を検討した。GFP強度でそれぞれの因子の骨芽細胞、軟骨細胞におけるRunx2発現誘導能を明らかにすることができた。また、これは、GFP抗体を用いた免疫組織染色法で確認することができた。一方、Runx2の結合配列をタンデムに6つ並べたDNAにminimal promoterをつないだDsRedトランスジェニックマウスを作製したが、DsRedの高発現マウスを得ることはできなかった。今回作製した、Runx2プロモーター・EGFPトランスジェニックマウスは、Runx2の発現を調節できる化合物のスクリーニング系に有用であり、骨粗鬆症や、変形性関節症治療薬の開発に大きく貢献すると考える。

Runx2 在成骨细胞/软骨细胞分化中发挥重要作用。 Runx2 表达和活性的时间和空间调节对于成骨细胞/软骨细胞分化和骨骼形成/维持程序至关重要。目的是利用EGFP和DsRed创建可同时观察Runx2表达和活性的转基因小鼠，并利用跖骨进行器官培养，建立可调节Runx2表达和活性的化合物的筛选系统。今年，我们建立了七个包含不同Runx2启动子区域的Runx2启动子/EGFP转基因小鼠品系。使用 GFP 抗体通过免疫组织学染色检查每个菌株中的 EGFP 表达。我们检查了胚胎第16.5天、1周和4周时成骨细胞和软骨细胞中的表达模式，并确定了适合检查成骨细胞和软骨细胞中Runx2表达诱导的系。利用这些细胞系的跖骨器官培养物，我们研究了 FGF2、FGF18、BMP-2 和 noggin 的作用。我们能够根据 GFP 强度阐明每个因子诱导成骨细胞和软骨细胞中 Runx2 表达的能力。此外，这可以通过使用 GFP 抗体的免疫组织学染色来证实。另一方面，我们通过将最小启动子连接到含有串联排列的六个 Runx2 结合序列的 DNA 来创建 DsRed 转基因小鼠，但我们无法获得具有高 DsRed 表达的小鼠。我们相信，我们创建的Runx2启动子/EGFP转基因小鼠将可用作可调节Runx2表达的化合物的筛选系统，并将极大地促进治疗骨质疏松症和骨关节炎的药物的开发。

项目成果

Bone mass regulation by osteocyte network

通过骨细胞网络调节骨量

• 发表时间: 2008
• 作者: 日野真美;中西雅之;中矢結子;古川美子;野元裕;六反田賢;Komori T
• 通讯作者: Komori T

FGFシグナルとRunx2

FGF 信号传导和 Runx2

• 发表时间: 2008
• 作者: 日野真美;中西雅之;中矢結子;古川美子;野元裕;六反田賢;Komori T;Komori T;小守壽文;Rokutanda S;小守壽文;鎌倉尚史;小守壽文;Carolina A.Yoshida;香川良介;小守壽文
• 通讯作者: 小守壽文

骨芽細胞特異的発現を誘導するDNA及びその塩基配列

诱导成骨细胞特异性表达的DNA及其碱基序列

• 发表时间: 2009

THE BONE :骨形成研究

骨骼：骨形成研究

• 发表时间: 2008
• 作者: 日野真美;中西雅之;中矢結子;古川美子;野元裕;六反田賢;Komori T;Komori T;小守壽文;Rokutanda S;小守壽文;鎌倉尚史;小守壽文;Carolina A.Yoshida;香川良介;小守壽文;小守壽文;小守壽文
• 通讯作者: 小守壽文

Regulation of tooth and bone development by RUNX2

RUNX2 对牙齿和骨骼发育的调节

• 发表时间: 2009
• 作者: Kuo YH;Zaidi SK;Gornostaeva S;Komori T;Stein GS;Castilla LH;Kuo YH;Rokutanda S;Sakamoto J;Takeda Y;Tanaka T;Miyazaki T;T.Komori
• 通讯作者: T.Komori