胎生期レパトアの機能解析と自己免疫疾患に及ぼすN領域の影響

胚胎谱的功能分析及N区对自身免疫性疾病的影响

• 批准号: 07670531
• 负责人: 小守 壽文
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670531/
• 关键词: TdT(Terminal deoxynucleotidyl transferase); T、B細胞レパトア; ジーンターゲティング; N領域; ネガティブセレクション; プロモーター置換; 免疫グロブリン遺伝子; T細胞レセプター遺伝子

V (variable) 、D (diversity) 、J (joining)の3種の遺伝子の再構成によって形成されたT細胞レセプター(T cell receptor ; TCR)、免疫グロブリン(immunoglobulin ; Ig)遺伝子の可変領域の多様性は、V-D,D-J結合部でのTerminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)による塩基付加(N領域)によってさらに増大される。TdTはagc dependentおよびstage specificな発現調節によりT細胞、B細胞レパトアの形成に多大な影響力を持つが、これがいかなる意味をもつかを明らかにするためジーンターゲティングの手法を用いTdTのプロモーターのみをE_μV_H(IgのV_H遺伝子のプロモーターとH鎖μ領域のエンハンサー)あるいはT細胞特異的なlckプロモーターで置換しTdTの発現パターンを変え、全く新しいT細胞、B細胞レパトアを持ったマウスを作製した。TdTのプロモーターをE_μV_Hで置換したマウスでは、正常と同程度のTdTの発現を胸腺で見るほか正常では検出できない脾臓、骨髄、リンパ節、胎生期胸腺、胎生期肝臓でも強い発現がみられる。実際IgのIgH鎖、TCRのβ鎖、γ鎖遺伝子の約9割の塩基配列にN領域を認めた。正常ではIgL鎖にN領域はほとんど見られないが、E_μV_Hで置換したマウスのIgL鎖では2/3の塩基配列にN領域を認めた。したがって本来N領域を持たず多様性の制限されたIgL鎖にも新たな多様性を付加できたことになる。これらのヘテロおよびホモ変異マウスの骨髄ではB220^+IgM^+細胞が半分に減少しており、しかも脾臓におけるN領域の頻度は骨髄に比べ明らかに減少していた。この事はIgL鎖にN領域が付加されたB細胞は自己反応生を獲得し骨髄において選択的に除去される可能性を示唆する。胎生期にもTdTを発現するE_μV_H^<+/+>マウスおよびlck^<+/+>マウスは、胎生期レパトアの意義、N領域の胸腺選択に及ぼす影響、種々のγδT細胞の起源及び皮膚、粘膜への生着機序の解明にも役立つものと考える。

V（变量），D（多样性）和J（加入）T -CELL受体（T -Cell受体； TCR），免疫球蛋白（Imunoglobulin; Ig）的变量会因基本添加而进一步增加。 （N区）通过V-D和D-J连接中的末端脱氧核苷酸转移酶（TDT）。由于AGC依赖性和特定于阶段的表达，TDT对T细胞和B细胞的形成具有很大的影响，但是为了阐明任何含义，仅使用JEAN靶向方法的TDT启动子（IG的V_H基因启动子和H - - - - - - - - - - - - - - - 链μ -Area增强子）或T -Cell特异性LCK启动子以更改TDT表达模式，并具有全新的T -Cell和B细胞重复器的小鼠。在TDT启动子被E_μV_H取代的小鼠中，在胸腺中可以看到与正常情况相同的TDT表达，并且在脾脏，骨髓，淋巴结，淋巴结，胎儿寿命，脾和无法正常检测到的胎儿肝脏。实际上，批准了约90％的基因的碱基序列，Ig，TCR和γ链基因的Ig链被批准。在正常情况下，IGL链中几乎没有N个区域，但是小鼠的IGL链被E_μV_H替换为2/3碱基序列中的N-区域。因此，已将新的多样性添加到IGL链中，该链没有N-区域，并且多样性有限。在这些异质和HOHO变体小鼠的骨髓中，B220^+Igm^+细胞的细胞减少了一半，与骨髓相比，脾脏中的N-区域的频率明显降低。这表明在IGL链中添加了N区域的B细胞可能是自我反应性的，并且在骨髓中有选择地去除。 e_μV_H^<+/+>小鼠和lck^<+/+>小鼠，在胎儿时期也表达TDT，具有胎儿周期repatoa的重要性，对N-区域的胸骨选择，各种起源和皮肤的影响我们认为，γORNT细胞也可用于阐明粘膜的机理。

项目成果

Komori,T.,et al.: "Lack of N regions in antigen receptor variable region genes of TdT-deficient lymphocytes." Science. 261. 1171-1175 (1993)

Komori,T.,et al.：“TdT 缺陷淋巴细胞的抗原受体可变区基因中缺乏 N 区。”

Komori,T.,et al.: "Biased usage of two restricted V_H gene segments in V_H replacement." Eur.J.Immunol.23. 517-522 (1993)

Komori,T.,et al.：“V_H 替换中两个受限 V_H 基因片段的使用有偏差。”

Komori,T.: "Repertoires of antigen receptors in Tdt congenitally deficient mice." Intern.Rev.Immunol.(in press).

Komori,T.：“Tdt 先天性缺陷小鼠的抗原受体库。”

Komori,T.,et al.: "An aberrant splicing using a 3′cryptic splice site within C_<H1> exon induces truncated μ-chain production." Immunology.85. 166-170 (1995)

Komori, T., et al.：“使用 C_<H1> 外显子内 3 隐性剪接位点的异常剪接会诱导截短的 μ 链产生。”166-170 (1995)。

Y.Zhang,et al.: "The role of short homology repeats and TdT in generation of the invariant γδ antigen receptor repertoire in the fetal thymus." Immunity. 3. 439-447 (1995)

Y. 张等人：“短同源重复序列和 TdT 在胎儿胸腺中不变 γδ 抗原受体库的生成中的作用。”3. 439-447 (1995)。