Functional morphology of mice that can be visualized neuron-specific autophagy under stress

小鼠的功能形态可以可视化应激下神经元特异性自噬

基本信息

批准号：
21K06412
负责人：
田中雅樹
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kyoto Prefectural University of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

神経特異的なオートファジー活性可視化マウスの解析に取り組んでいる。既に研究室で作製して個体化した、syn1プロモーター下にニューロンに発現する、SYN1-GFP-LC3-RFPトランスジェニックマウスの脳組織発現についてまずは刺激を行わずに、脳全体について調べた。嗅球、線条体、海馬、橋核などにGFPを発現する細胞が出現した。大脳皮質や海馬でNeuNとの共存が見られるが、GFAPとの共存は見られず、これら発現細胞はニューロンであることが確かめられた。特に嗅球や海馬、線条体には軸索や樹状突起のような突起にGFPが出現し、RFPは主に細胞体に見られた。RFPは大脳皮質や海馬に発現があり、領域によって、ベースのオートファジー活性が異なることが示唆された。トランスジェニックマウスの初代培養細胞を用いた薬剤投与実験で、オートファジーを抑制するバフィロマイシンA1を投与するとGFP-LC3の凝集がみられ、オーファジーレセプターであるP62の凝集と共存が見られた。オートファジー活性化が進むと、理想的にはGFPとRFPの比が低下することになるが、実際オートファジー誘導剤である、リチウムを飲水に混ぜて1か月投与させると、海馬錐体細胞の細胞体、樹状突起でGFP/RFPが低下した。ただ、このトランスジェニックマウスの繁殖が野生型に比べると悪く、なかなかホモ接合体のマウスが生まれず、GFP-LC3やRFPの細胞内動態について、生化学的な評価を含めて、今年度詳細な検討を行う予定にしている。

我们正在研究神经特异性自噬活动可视化小鼠的分析。对整个大脑进行了检查，而没有刺激Syn1-GFP-LC3-RFP转基因小鼠的大脑组织表达，该小鼠已经在实验室中产生和个性化，并在Syn1启动子下的神经元中表达。表达GFP的细胞出现在嗅觉，线性体，海马和桥核中。在大脑皮层和海马中可以看到与NEUN的共存，但没有与GFAP共存，并且可以证实这些细胞是神经元。特别是，GFP出现在嗅觉球，海马和接线体中，例如轴和树突，RFP主要在细胞中发现。 RFP在大脑皮层和海马中表达，这表明碱自噬活性取决于区域。在使用转基因小鼠的第一代培养细胞的药物给药中，抑制自噬的Baphiromycin A1的施用具有GFP-LC3的凝聚力，并且共存，Orforesti受体的共存和凝聚力和共存。如果自噬激活进展，将降低GFP和RFP的比例，但是如果锂（实际上是一种自噬领先剂）与饮用水混合在一起，则它是一个hippocular cell。。但是，这种转基因小鼠的繁殖比野生型要差，很难创建HOMO托梁的小鼠，并且今年详细介绍了GFP-LC3和RFP的细胞内动力学，包括生化评估。考虑一下。