軸索型ギラン・バレー症候群先行感染菌由来蛋白の軸索膜ポア形成による傷害とその治療

轴突吉兰-巴利综合征感染前细菌蛋白质形成轴突膜孔造成的损伤及其治疗

基本信息

批准号：
20659141
负责人：
吉良潤一
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、軸索型ギラン・バレー症候群(GBS)発症予測、並びに迅速診断のためのC-Dps検出システム開発を目指している。我々は、ラット坐骨神経にC-Dps蛋白を直接的に注入することで、末梢神経伝導検査での伝導速度には変化は認められないものの、近位側刺激でのcMAPと遠位側刺激でのcMAPの比率が低下すること、そして末梢神経のランビエ絞輪部におけるNaチャンネル、並びにCasprの染色性の低下がこれに関与することを報告している。本年度は患者血清中のC-Dps蛋白をSandwich ELISAにより検出するシステムを開発した。我々が作製したC-Dpsモノクローナル抗体(25G/IgG2b)をperoxidase標識を行い、エピトープの異なる抗C-Dpsモノクローナル抗体(16A)をELISAプレートに5μg/mlで固相化した。患者血清を50μl/wellでincubationし、洗浄後にHRP標識抗c-Dps抗体(25G)を用いて検出した。対象はCampylobacter jejuni(C. jejuni)感染後GBS患者24名、呼吸器感染後GBS患者16名、Fisher症候群患者6名、C.jejuni腸炎患者5名、健常者21で検討を行った。Cut-off値を44.5ng/mlとした場合、C.jejuni感染後GBS患者では5名(20.8%)で陽性であったが、呼吸器感染後GBSやC. jejuni腸炎患者、健常者、Fisher症候群では認められなかった。以上の結果は、C. jejuni感染後GBS患者では腸炎後に体内にC-Dps蛋白が侵入していることを示している。C-Dps蛋白は末梢神経への直接的な伝導障害を有することからも、C. jejuni感染後GBSの病態形成に体内に侵入したC-Dps蛋白が関連する可能性が示唆される。今後、この検出システムを用いて、C.jejuni感染後GBSの早期診断への応用や臨床パラメーターとの関連を検討し、その意義を解明したい。

在本研究中，我们的目标是开发一种 C-Dps 检测系统，用于预测轴突格林-巴利综合征 (GBS) 的发病并进行快速诊断。通过将C-Dps蛋白直接注射到大鼠坐骨神经中，我们发现虽然在周围神经传导研究中没有观察到传导速度的变化，但近端刺激和远端刺激中的cMAP报告显示周围神经中cMAP的比例降低，并且这与周围神经 Ranvier 缘中 Na 通道和 Caspr 染色的减少有关。今年，我们开发了一种使用夹心 ELISA 检测患者血清中 C-Dps 蛋白的系统。将我们制备的C-Dps单克隆抗体（25G/IgG2b）进行过氧化物酶标记，并将具有不同表位的抗C-Dps单克隆抗体（16A）以5μg/ml固定在ELISA板上。将患者血清以50μl/孔孵育，洗涤后，使用HRP标记的抗c-Dps抗体(25G)进行检测。研究对象为空肠弯曲菌（C. jejuni）感染后 GBS 患者 24 例、呼吸道感染后 GBS 患者 16 例、Fisher 综合征患者 6 例、空肠弯曲菌肠炎患者 5 例以及健康对照者 21 例。当临界值设定为44.5 ng/ml时，空肠弯曲菌感染后GBS患者有5例（20.8%）呈阳性，但呼吸道感染后GBS患者中有5例（20.8%）为空肠弯曲菌肠炎患者。，健康受试者，未观察到费舍尔综合征。这些结果表明，在感染空肠弯曲菌的GBS患者发生肠炎后，C-Dps蛋白侵入体内。 C-Dps蛋白对周围神经有直接传导障碍，提示进入体内的C-Dps蛋白可能参与空肠弯曲菌感染后GBS的发病机制。未来，我们希望利用该检测系统检验其在空肠弯曲菌感染后GBS早期诊断中的应用及其与临床参数的关系，并阐明其意义。