HIV-1のヒト正常リンパ球ーの潜伏感染機構の解明

阐明HIV-1在人类正常淋巴细胞中的潜伏感染机制

• 批准号: 11161217
• 负责人: 吉良 潤一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11161217/
• 关键词: HIV-I; 持続感染; 潜伏感染; キメラウイルス; pol; vpu; env; T細胞; HIV-I; 持続感染; 潜伏感染; キメラウイルス; pol; vpu; env; T細胞

目的:HIV-1感染症の治療はHIV-1の排除が重要である。最近,逆転写酵素阻害剤とプロテアーゼ阻害剤の組み合わせにより,血中ウイルス量を測定感度以下に低下させることが可能となったが,静止期細胞に感染しているウイルスの除去は困難である。我々は,これまでウイルス分離株により感染性の違いがある可能性を指摘している。今回は,さらに静止期T細胞への感染性に関与するウイルスゲノムの領域と,ウイルス増殖サイクルでの作用部位を検討した。方法:HIV抗体陰性のドナーより,CD4陽性T細胞を分離精製した。得られた細胞をウイリス液と37℃2時間インキュベートした後,遊離のウイルスをよく洗い流した。感染後4日間にPHA+IL-2によって活性化刺激を与え,経時的に培養上清中のp24gag抗原量を定量した。ウイルス株はJR-CSF,JR-FL,SF162,BaL(R5株),NL4-3(X4株),SF13(R5X4株)を使用した。さらにJR-CSF,JR-FL,NL4-3については,それぞれ相互に組み替えたキメラウイルスも作成した。また定量的PCR法を用いて,感染細胞内でのウイルスDNA合成効率も検索した。結果:JR-FL,BaL,NL4-3,SF13は活性化刺激後に多量の子孫ウイルスを産生したが,JR-CSF,SF162は活性化刺激後にも子孫ウイルスを産生はしなかった。そこで,責任部位を決定するためにキメラウイルスを用いたところ,env領域ではなく,polからvpuまでの領域が感染効率を決定していることが示唆された。一方,PCRを用いた解析からは,感染できない株は,逆転写,あるいはそれ以前(吸着,侵入,逆転写)の過程の効率が悪いことがわかった。結論:静止期T細胞への感染性は,分離株依存性で,polからvpuまでの領域がその感染性を決定している。感染できない株は逆転写以前の段階での効率が悪い。今後の予定:今後は,キメラの細かい検討を行い,静止期T細胞への感染性を決定する部位を限局化するとともに,naive T cells,memory T cellsなどを標的とした際の感染性や,さらに感染成立に必要な最低限の刺激の検討などを予定している。

目的：消除HIV-1对于治疗HIV-1感染很重要。最近，逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的组合使血液病毒载量降低到测量敏感性以下是可能，但是很难去除被固定细胞感染的病毒。我们先前指出，病毒分离株之间的感染性可能存在差异。在本文中，我们进一步研究了病毒基因组的区域，该区域涉及静息相细胞的感染性以及病毒增殖周期中的作用部位。方法：分离CD4阳性T细胞并从HIV抗体阴性供体中纯化。将所得的细胞与Willis溶液在37°C中孵育2小时，然后将游离病毒彻底洗净。感染后四天用PHA+IL-2给出激活刺激，并随时间定量培养上清液中的P24GAG抗原量。病毒菌株是JR-CSF，JR-FL，SF162，BAL（R5菌株），NL4-3（X4菌株）和SF13（R5X4菌株）。此外，对于JR-CSF，JR-FL和NL4-3，我们还创建了嵌合的嵌合病毒。定量PCR还用于寻找感染细胞中病毒DNA合成的效率。结果：JR-FL，BAL，NL4-3和SF13在激活刺激后产生了大量后代病毒，而JR-CSF和SF162在激活刺激后没有产生后代病毒。因此，当使用嵌合病毒确定责任部位时，建议从POL到VPU而不是ENV区域的区域确定感染效率。另一方面，PCR分析表明，未感染的菌株的逆转录或先验效率低下（吸附，浸润，逆转录）。结论：对静息相细胞的感染性是孤立依赖性的，从POL到VPU的区域确定其感染力。在逆转录之前，无法感染的菌株效率低下。未来的计划：将来，我们将对嵌合体进行详细检查，定位确定固定T细胞感染性的部位，并在靶向幼稚的T细胞，记忆T细胞以及建立感染所需的最小刺激时考虑感染力。