HIV-1のヒト正常リンパ球ーの潜伏感染機構の解明

阐明HIV-1在人类正常淋巴细胞中的潜伏感染机制

基本信息

批准号：
11161217
负责人：
吉良潤一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11161217/
关键词：
HIV-I 持続感染潜伏感染キメラウイルス pol vpu env T細胞

项目摘要

目的:HIV-1感染症の治療はHIV-1の排除が重要である。最近,逆転写酵素阻害剤とプロテアーゼ阻害剤の組み合わせにより,血中ウイルス量を測定感度以下に低下させることが可能となったが,静止期細胞に感染しているウイルスの除去は困難である。我々は,これまでウイルス分離株により感染性の違いがある可能性を指摘している。今回は,さらに静止期T細胞への感染性に関与するウイルスゲノムの領域と,ウイルス増殖サイクルでの作用部位を検討した。方法:HIV抗体陰性のドナーより,CD4陽性T細胞を分離精製した。得られた細胞をウイリス液と37℃2時間インキュベートした後,遊離のウイルスをよく洗い流した。感染後4日間にPHA+IL-2によって活性化刺激を与え,経時的に培養上清中のp24gag抗原量を定量した。ウイルス株はJR-CSF,JR-FL,SF162,BaL(R5株),NL4-3(X4株),SF13(R5X4株)を使用した。さらにJR-CSF,JR-FL,NL4-3については,それぞれ相互に組み替えたキメラウイルスも作成した。また定量的PCR法を用いて,感染細胞内でのウイルスDNA合成効率も検索した。結果:JR-FL,BaL,NL4-3,SF13は活性化刺激後に多量の子孫ウイルスを産生したが,JR-CSF,SF162は活性化刺激後にも子孫ウイルスを産生はしなかった。そこで,責任部位を決定するためにキメラウイルスを用いたところ,env領域ではなく,polからvpuまでの領域が感染効率を決定していることが示唆された。一方,PCRを用いた解析からは,感染できない株は,逆転写,あるいはそれ以前(吸着,侵入,逆転写)の過程の効率が悪いことがわかった。結論:静止期T細胞への感染性は,分離株依存性で,polからvpuまでの領域がその感染性を決定している。感染できない株は逆転写以前の段階での効率が悪い。今後の予定:今後は,キメラの細かい検討を行い,静止期T細胞への感染性を決定する部位を限局化するとともに,naive T cells,memory T cellsなどを標的とした際の感染性や,さらに感染成立に必要な最低限の刺激の検討などを予定している。

目的：消除 HIV-1 对于治疗 HIV-1 感染非常重要。最近，逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的组合使得将血液中的病毒量降低到测量灵敏度以下成为可能，但很难去除感染静止细胞的病毒。我们之前已经指出，根据病毒分离株的不同，传染性可能存在差异。在这项研究中，我们进一步研究了病毒基因组中与静止 T 细胞感染相关的区域以及病毒复制周期中的作用位点。方法：从 HIV 抗体阴性供体中分离纯化 CD4 阳性 T 细胞。将获得的细胞与Willis溶液在37℃下孵育2小时，然后彻底洗去游离病毒。感染后用PHA+IL-2进行激活刺激4天，并随着时间的推移对培养物上清液中p24gag抗原的量进行定量。使用的病毒株是JR-CSF、JR-FL、SF162、BaL(R5株)、NL4-3(X4株)和SF13(R5X4株)。此外，对于 JR-CSF、JR-FL 和 NL4-3，我们创建了彼此重组的嵌合病毒。我们还使用定量 PCR 研究了受感染细胞中病毒 DNA 合成的效率。结果：JR-FL、BaL、NL4-3和SF13在激活刺激后产生大量子代病毒，而JR-CSF和SF162即使在激活刺激后也没有产生子代病毒。因此，当我们使用嵌合病毒来确定责任位点时，有人建议从pol到vpu的区域，而不是env区域，决定了感染效率。另一方面，PCR分析表明，不能被感染的菌株在逆转录或早期过程（吸附、入侵、逆转录）中效率较差。结论：对静止T细胞的感染力具有分离依赖性，pol至vpu的区域决定了其感染力。无法感染的菌株在逆转录之前的阶段效率低下。未来计划：未来，我们将对嵌合体进行详细研究，定位决定静止T细胞感染性的位点，以及确定针对幼稚T细胞、记忆T细胞等时的感染性。此外，他们计划考虑发生感染所需的最小刺激。