RNA干渉を用いたインビボ神経節遺伝子発現ノックダウン法の臨床応用可能性の検証

利用RNA干扰验证体内神经节基因表达敲低方法的临床适用性

基本信息

批准号：
19650095
负责人：
加藤総夫
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

In vivo神経節gene silencing法の方法を昨年度までに確立した。同方法を応用し、内臓由来一次求心線維の脳内終末に発現すると予想されているP2X3サブユニット分子(p2x3r)をノックダウンしたところ、導入11-15日後、孤束核におけるP2X3サブユニットタンパクの発現はsiRNA導入側特異的にほぼ半減した。ATPおよびα,β-methylene ATPの効果を定量的に評価したところ、siRNA導入によってα,β-methylene ATPの作用が約45%まで著明にかつ有意に減少した。脱感作の遅いP2X2/3ヘテロ受容体型の応答がP2X2ホモ受容体型に変化した可能性が強く支持された。本年度は、以上の成果を公表するための論文作成に必要となる追加実験を主に行った。残念ながら、本報告書の執筆時点では投稿論文受理に至っていないが、速やかに公開し、この方法を広くさまざまな分子に応用すべく、見学者を広く受け入れ、技術の公開に務めた。また、両側性の電気穿孔法も、体重の減少、行動上の異常などの問題なく行うことが可能となり、in vivoへの応用も可能であることが示された。一方、新たな問題点として、迷走神経求心路の発現分子特性の左右差が予想以上に大きいこと、一次求心神経終末発現分子と類似のしかし薬理学的性質の異なる分子が脳内に発現しており、そのノックダウンの効果が予想以上に単純ではないこと、などの新たな知見が得られたため、本技術を公開した後に新たに取り組む必要がある。

去年我们建立了体内神经节基因沉默方法。采用相同的方法，我们敲低了 P2X3 亚基分子 (p2x3r)，该分子预计在源自大脑内脏器官的初级传入纤维末端表达，表达以 siRNA 特异的方式减少了近一半。 - 介绍侧面。当定量评估ATP和α,β-亚甲基ATP的效果时，通过引入siRNA，α,β-亚甲基ATP的效果显着且显着地降低了约45%。这有力地支持了脱敏缓慢的P2X2/3异源受体类型的反应转变为P2X2同源受体类型的可能性。今年，我们主要进行了撰写论文发表上述结果所需的额外实验。不幸的是，在撰写本报告时，提交的论文尚未被接受，但我们努力向公众开放该技术并欢迎广泛的访问者，以便快速公开并将该方法应用于分子种类繁多。此外，双侧电穿孔可以在没有体重减轻或行为异常等问题的情况下进行，这表明它可以在体内应用。另一方面，新的问题包括迷走神经传入神经表达的分子特征的左右差异比预期更大，迷走神经传入神经表达的分子特征与初级传入神经末梢相似但药理特性不同。随着新的发现，比如击倒效应并不像想象的那么简单，这项技术公开后还需要做出新的努力。