Expression of prestin, moter protein of outer hair cells.

外毛细胞运动蛋白 prestin 的表达。

• 批准号: 19591980
• 负责人: MATSUDA Keiji
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19591980/
• 关键词: モータ蛋白; プレスチン; 膜発現; 外有毛細胞; パッチクランプ; 難聴

プレスチン蛋白は、哺乳類の外有毛細胞に発現し、外有毛細胞の運動を介して音響信号増強に関与している。プレスチン機能の低下は臨床的には語音明瞭度の低下や自発的耳音響放射の消失となって表れ、中～高度難聴の原因となりうると考えられる。プレスチンの機能障害によって起こる聴覚学的な評価は、従来パッチクランプによる細胞レベルでの評価が行われてきた。しかし、プレスチンそのものの発現量の違いによる機能上の評価は、まだ十分に検討されていない。そこでプレスチン発現量を様々なレベルで阻害するsiRNAを作成し、さまざまなレベルのプレスチン発現量を人為的に作り出し、その電気生理的評価を行うことにした。293 cellの発現実験では、4種類のsiRNAは、Prestin発現量の電気生理学的指標であるcharge densityをwild typeのみの発現時(100%)に比べ、15%～46%の範囲に抑制した。Charge densityと実際の発現タンパク量の指標であるWestern blotには相関がみられた。Prestinの発現量が多いほど、V1/2は脱分極側にシフトするのが観察され、Prestinの発現量そのものが電気生理機能の修飾因子であることが確認された。

Prestin 蛋白在哺乳动物外毛细胞中表达，并通过外毛细胞运动参与声信号增强。 prestin功能下降在临床上表现为言语清晰度下降和自发性耳声发射丧失，并被认为是中度至重度听力损失的原因。传统上使用膜片钳技术在细胞水平上评估由 prestin 功能障碍引起的听力学评估。然而，基于 prestin 本身表达水平差异的功能评估尚未得到充分研究。因此，我们决定创建在不同水平抑制prestin表达的siRNA，人工创建不同水平的prestin表达，并进行电生理学评估。在使用293细胞的表达实验中，与单独表达野生型时（100%）相比，四种类型的siRNA将电荷密度（Prestin表达的电生理指标）抑制在15%至46%的范围内。电荷密度和蛋白质印迹之间存在相关性，蛋白质印迹是表达蛋白质实际量的指标。观察到Prestin的表达水平越高，V1/2向去极化侧移动的越多，证实Prestin的表达水平本身是电生理功能的调节剂。