腎髄質部細いヘンレの上行脚のクロライド輸送調節機構の解析

肾髓质Henle升肢狭窄氯离子转运调控机制分析

基本信息

批准号：
08671269
负责人：
根東義明
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヘンレの細い上行脚(以下ATL)は、腎髄質内層に位置し、受動的NaCl拡散をつかさどる。この部位のNaClの再吸収は、細胞膜上に著しく豊富なCl^-チャンネルClC-K1と細胞間隔のナトリウム透過性による。Cl^-チャンネルは、細胞内外のpHやCa^<++>により調節される。細胞内のpHやCa^<++>の変化がCl-透過性に与える影響について検討した。ゴールデンハムスターより左腎を摘出し、ATLを単離し、倒立顕微鏡上で微小潅流した。経上皮電位は管腔内パ-フュージョンピペットと浴液の3M KClのflowing boundary電極間で測定し、浴液側のNaClの濃度を2分の1に低下させたときに生じるNaCl拡散電位と細胞内pHおよびCa^<++>の変化を観察した。amilorideとnigericinは、NaCl拡散電位を低下させなかった。nicardipineは有意に経上皮電位を上昇させ、BAPTA-AMは低下させた。NH4Cl負荷時、浴液のpHを5.8に低下させると、細胞内pHの低下と拡散電位の低下が起こったが、NH4Cl負荷では除去時に拡散電位の変化は見られなかった。nigericinおよびBAPTA-AM負荷時、拡散電位は変化せず、細胞内pHの低下と細胞内Ca^<++>の上昇が観察された。BAPTA-AMは経上皮電位を低下させ、細胞内pHと細胞内Ca^<++>も低下させた。浴液酸性化により、拡散電位は低下し、nigericin投与下では同様の浴液酸性化がより強い拡散電位の低下を起こした。BAPTA-AMにより細胞内Ca^<++>濃度を低下させると、拡散電位は徐々に低下し、BAPTA-AM投与後には浴液酸性化による拡散電位の低下は著しく促進された。trifluoperazineおよびW-7の存在下では浴液酸性化による拡散電位の低下速度は促進され、Ca^<++>・カルモデュリンは依存性キナーゼII抑制薬のKN62の存在下では、浴液酸性化による拡散電位の低下促進は観察されなかった。以上より、浴液酸性化によるCl-透過性の抑制は細胞外からの作用で、細胞内Ca^<++>の変動はCa^<++>・カルモデュリン複合体を介してCl^-チャンネルの細胞外pH感受性を抑制すること、Ca++・カルモデュリン複合体のCl^-チャンネルの細胞外pH感受性にたいする作用はCa^<++>・カルモデュリン依存性キナーゼIIを介さないことが示唆された。

细亨勒升肢 (ATL) 位于肾髓质内层，负责 NaCl 被动扩散。该位点的 NaCl 重吸收是由于细胞膜上显着丰富的 Cl^-通道 ClC-K1 和细胞间隙的钠渗透性所致。 Cl 2 -通道受细胞内和细胞外pH和Ca 2+ 调节。我们研究了细胞内pH和Ca^++的变化对Cl-渗透性的影响。摘除金黄地鼠左肾，分离ATL，倒置显微镜下进行微灌注。跨上皮电位是在管腔内灌注移液管和浴液中的3M KCl的流动边界电极之间测量的，当浴液中的NaCl浓度降低一半时产生的NaCl扩散电位以及细胞内部pH和的变化观察到Ca^++。阿米洛利和尼日利亚菌素不会降低 NaCl 扩散电位。尼卡地平显着增加了跨上皮电位，而 BAPTA-AM 则降低了跨上皮电位。当加载NH4Cl时，将浴液的pH值降低至5.8导致细胞内pH值降低和扩散电位降低，但当去除NH4Cl时没有观察到扩散电位的变化。当负载尼日利亚素和BAPTA-AM时，扩散电位没有改变，但观察到细胞内pH降低和细胞内Ca ++ 增加。 BAPTA-AM降低了跨上皮电位，并且还降低了细胞内pH和细胞内Ca ++ 。浴溶液的酸化降低了扩散电势，并且浴溶液的类似酸化在给予尼日利亚霉素的情况下导致扩散电势更强的降低。当BAPTA-AM降低细胞内Ca ++ 浓度时，扩散电位逐渐降低，并且在施用BAPTA-AM后，由于浴酸化而导致的扩散电位的降低显着加速。在三氟拉嗪和W-7的存在下，由于浴液酸化而导致的扩散电位下降的速度加快，在依赖性激酶II抑制剂KN62的存在下，Ca^++>·钙调蛋白受到浴液的影响没有观察到溶液酸化促进扩散电位的降低。由上可知，浴液酸化对Cl-透过性的抑制是来自细胞外的作用，细胞内Ca^++的波动是由Cl^-通道经由Ca^++/钙调蛋白复合物引起的。表明Ca ++ /钙调蛋白复合物对Cl 2 -通道的细胞外pH敏感性的影响不是由Ca ++ /钙调蛋白依赖性激酶II介导的。