腎髄質部細いヘンレの上行脚の細胞内pH調節機構の解析

Henle升肢即狭窄肾髓质的细胞内pH调节机制分析。

基本信息

批准号：
05770508
负责人：
根東義明
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

腎髄質部細いヘンレの上行脚(以下ATL)をハムスター腎より微小単離し、例立顕微鏡上にセットさせた灌流槽に移した上で、マイクロマニピュレーターを用いて管腔内を微小灌流した。ATLの外液側に2uMのBCECF/AMを加え、室温にて30分間ATLをインチュベートし、BCECFをATL細胞内にトラップさせた。さらに、オリンパスのOSP-3装置を用いて、ATL内BCECFを励起し、コンピュータ解析により、細胞内pHを経時的に測定した。定常状態でHepes緩衝リンゲル液中においてATLの細胞内pH(以下pHi)は7.05だった。溶液側のpHを低下させると細胞内pHも低下したが、管腔内pHを下げた際のpHiの低下は小さく、ATLのpHiが主に血管側のpHに依存していることがわかった。ATLの血管側のpHi調節系のメカニズムを明らかにするため、血液側のナトリウムイオンを除去するとpHiはすみやかに6.9以下に低下し、同側にアミロライド0.1mMを加えた場合にもpHiは同程度の低下を示した。NH_4CL loading法により、ATL細胞内酸負荷をおこなり、pHiの回復期の回復速度を観察したが、血液側のNaイオン除去と0.1mMアミロライドはいずれも回復を強く抑制し、Hポンプ抑制薬のN-エチルアレイマイドは回復速度に影響を与えなかった。さらにNEM(N-エチルマレイマイド)自体は定常状態でのpHiに対しては管腔側からも血液側からも変化をおこさなかった。これらの実験結果は、C0_2/HCO_3カロリンゲル液中でも同様に認められた。また、ATL外溶液中よりのKイオンの除去もpHiには影響を与えないことが明らかとなった。以上のことからATLのpHiは血液側に存在するNa/H交換輸送系(アミロライド感受性)により主に調節されており、HポンプやH/K交換ポンプはほとんど存在していないとの結論に達した。

将肾髓质中狭窄的亨利升肢 (ATL) 从仓鼠肾脏中显微分离出来，转移到设置在示例显微镜上的灌注罐中，并使用显微操作器在管腔内进行微灌注。将2 uM BCECF/AM添加到ATL的外部溶液侧，并将ATL在室温下孵育30分钟以将BCECF捕获在ATL细胞内。此外，使用奥林巴斯 OSP-3 装置激发 ATL 中的 BCECF，并使用计算机分析随时间测量细胞内 pH 值。 Hepes缓冲林格氏溶液中ATL稳态时的细胞内pH(以下简称pHi)为7.05。当溶液侧的pH值降低时，细胞内的pH值也降低，但当管腔内的pH值降低时，pHi的降低幅度较小，表明ATL的pH值主要取决于血管侧的pH值。为了阐明ATL血管侧pHi调节系统的机制，当去除血液侧的钠离子后，pHi迅速降至6.9以下，当向同侧添加0.1mM阿米洛利时， pHi 保持在相同水平。我们采用NH_4CL负载法进行ATL胞内酸负载，观察pHi恢复阶段的恢复速度。血侧Na离子去除和0.1mM阿米洛利均强烈抑制恢复，H泵抑制剂N-乙基酰亚胺对恢复没有影响。恢复率。此外，NEM（N-乙基马来酰亚胺）本身在稳态下不会引起管腔侧或血液侧的 pHi 发生任何变化。这些实验结果也在CO_2/HCO_3卡罗林凝胶溶液中观察到。此外，还发现从 ATL 外部溶液中去除 K 离子不会影响 pHi。综上所述，我们得出结论，ATL的pHi主要受血液侧存在的Na/H交换转运系统（米洛利敏感）调节，并且几乎不存在H泵或H/K交换泵。