DRIL1の機能解析と口腔発癌における関与

DRIL1的功能分析及其与口腔癌发生的关系

• 批准号: 06F06261
• 负责人: 池田 正明
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06F06261/
• 关键词: 口腔癌; アポトーシス; p53; 癌抑制遺伝子; クロマチン構造変換; DRIL1; 核マトリクス; 細胞増殖

本共同研究では、DRIL1がp53と協調的に働く転写因子としてp53標的遺伝子とp53蛋白質の両方に結合し、p53の翻訳後修飾を仲介する重要な因子であることを明らかにするとともに、DRIL1遺伝子の異常が口腔癌におけるp53耐性機序の獲得に関与している可能性を検討することを目的としている。(1)p53による転写制御におけるDRIL1の役割既に癌抑制遺伝子p53の制御に重要なPMLタンパク質が核マトリクス結合因子DRIL1と直接結合することを明らかにしている。本年度はDNA障害で誘導された内在性p53が内在性DRIL1と結合することを見出した。さらにp53とDRIL1がin vitroで直接結合する知見を得た。(2)p53タンパク質の翻訳後修飾におけるDRIL1の役割siRNAを用いたDRIL1ノックダウン実験の結果、p53の機能が著しく抑制されることを見出している。さらに詳細に解析するため、導入効率の高いアデノウイルスを用いてshRNA発現ベクターを用いて実験をおこなったが、十分なノックダウン効果が得られなかった。現在、使用するベクターをより長期間の発現に優れたレンチウイルスベクターに変更して解析をおこなっている。(3)口腔癌細胞株癌におけるDRIL1の制御異常口腔癌細胞株癌におけるp53の制御異常について、セリン46のリン酸化障害がp53のアポトーシス誘導に対する口腔癌細胞株の抵抗性獲得に重要であることを既に報告している。本年度、DRIL1とp53を同時にp53抵抗性細胞株に導入するとアポトーシスが誘導されることを見出した。さらにp53のリン酸化非依存性にp53を直接活性化する化学物質ニュートリン3を用いてさらに解析し、ニュートリン3存在下でもp53によるアポトーシス誘導にはセリン46のリン酸化が必要であることを見出した。

在这项联合研究中，我们揭示了DRIL1是一种与p53协同作用的转录因子，同时与p53靶基因和p53蛋白结合，是介导p53翻译后修饰的重要因子。研究 p53 异常是否参与口腔癌中 p53 耐药机制的获得。 (1)DRIL1在p53转录调节中的作用 已经发现，对于调节抑癌基因p53很重要的PML蛋白直接与核基质结合因子DRIL1结合。今年，我们发现DNA损伤诱导的内源性p53与内源性DRIL1结合。此外，我们发现p53和DRIL1在体外直接结合。 (2)DRIL1在p53蛋白翻译后修饰中的作用使用siRNA进行DRIL1敲低实验的结果，我们发现p53功能被显着抑制。为了更详细的分析，我们使用转染效率高的腺病毒和shRNA表达载体进行了实验，但没有获得足够的敲低效果。目前，我们正在将使用的载体改为慢病毒载体进行分析，该载体具有良好的长期表达能力。 (3)口腔癌细胞系中DRIL1的异常调节关于口腔癌细胞系中p53的异常调节，丝氨酸46的磷酸化受损对于口腔癌细胞系获得对p53诱导的细胞凋亡的抵抗性是重要的。 。今年，我们发现将 DRIL1 和 p53 同时引入 p53 耐药细胞系会诱导细胞凋亡。使用 nutlin-3（一种独立于 p53 磷酸化直接激活 p53 的化学物质）进行的进一步分析表明，即使在 nutlin-3 存在的情况下，p53 诱导细胞凋亡也需要丝氨酸 46 的磷酸化。

项目成果

Defect in serine 46 phosphorylation of p53 contributes to acquisition of p53 resistance in oral squamous cell carcinoma cells

• DOI: 10.1038/sj.onc.1209158
• 发表时间: 2006-02-23
• 期刊: ONCOGENE
• 影响因子: 8
• 作者: Ichwan, SJA;Yamada, S;Ikeda, MA
• 通讯作者: Ikeda, MA

he Defect in Ser46 Phosphorylation of p53 Contributes to the Mechanism of Acquired Resistance to p53 Gene Therapy in Oral Squamous CellCarcinoma Cells

p53 Ser46 磷酸化缺陷导致口腔鳞状细胞癌细胞对 p53 基因治疗获得性耐药机制

• 发表时间: 2008
• 期刊: Oral Biosciences
• 作者: Ichwan SJA;Ikeda MA
• 通讯作者: Ikeda MA

DRIL1 is involved in p53-target gene expression and apoptosis

DRIL1 参与 p53 靶基因表达和细胞凋亡

• 发表时间: 2007
• 作者: Ichwan SJA;Otsu M;Yamada S;Ikeda MA
• 通讯作者: Ikeda MA

High risk human papillomavirus type 16 E7 oncogene associates with Cdc25A over experssion in oral squamous cell carcinoma

高危人乳头瘤病毒16型E7癌基因与口腔鳞状细胞癌中Cdc25A过度表达相关

• 发表时间: 2007
• 期刊: Vichows Arch 450
• 作者: Bhawal UK;Sugiyama M;Nomura Y;Sawajiri M;Tsukinoki K;Ikida MA;Kuniyasu H
• 通讯作者: Kuniyasu H