神経障害性の痛みの遺伝子治療を目指した非ウイルスベクターの創製

创建用于神经性疼痛基因治疗的非病毒载体

基本信息

批准号：
06F06106
负责人：
田畑泰彦
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06F06106/
关键词：
痛み siRNA 末梢神経非ウイルス性遺伝子キャリア痛み関連遺伝子

项目摘要

病気の際のみではなく、手術後においても、痛みは患者にとって大きな苦痛となっている。痛みのコントロールの臨床的意義の大きなことは言うまでもない。しかしながら、わが国では、この痛みに対する研究はあまり活発に行われていない。本研究の目的は、末梢神経特異的な遺伝子導入および発現効率の高い非ウイルス性遺伝子キャリアを研究開発し、痛みをコントロールする遺伝子やsmall-interfering RNA (siRNA)を神経細胞特異的に末梢から逆行性に導入する技術を確立することである。本年度は、昨年度の研究で得られた、末梢神経細胞への遺伝子発現効率が最も高い非ウイルス性遺伝子キャリア(カチオン化プルラン)を用いて、動物実験を行い、神経細胞体への逆行性の遺伝子導入について検討した。カチオン化プルランとルシフェラーゼをコードするプラスミドDNAとからなるポリイオンコンプレックスをラットの下肢、フットパットより投与し、その遺伝子発現部位を調べた。その結果、フットパット、末梢神経の後根神経節、および坐骨神経での発現を検出することができた。また、緑色蛍光蛋白質(GFP)をコードするプラスミドDNAを用いた同様の実験において、GFPの発現を免疫組織化学染色により検出できた。遺伝子発現の増強を目的として、核移行シグナル分子およびレクチンなどを組み込んだカチオン化プルランの作製を試みたが期待通りのものを作製することはできなかった。カチオン化プルランとルシフェラーゼをコードするプラスミドDNAとからなるポリイオンコンプレックスは、骨髄(MSC)および脂肪由来間葉系幹細胞(ASC)に対しても高いルシフェラーゼ発現を示した。得られたルシフェラーゼ発現MSCをくも膜下腔内へ投与したところ、MSCは脊髄へ生着し、ルシフェラーゼを発現することがわかった。

疼痛是患者不仅在患者生病时，而且在手术后的疼痛。不用说，这当然是控制疼痛的主要临床意义。但是，在我国，对这种痛苦的研究不是很活跃。这项研究的目的是研究和开发在周围神经特异性基因转移和表达中具有高效率的非病毒基因载体，并建立一种技术，用于特定于周围细胞的特定引入疼痛控制基因和小型疼痛控制的RNA（siRNA）。今年，我们使用非病毒基因载体（阳离子pullulan）进行了动物实验，该基因表达是外周神经细胞中基因表达的最高效率，该基因表达在去年的研究中获得了研究逆行基因转移到神经元中的转移。从下肢和大鼠的下肢和脚踏板中施用了由阳离子的纯lulan和质粒DNA组成的Polyion络合物，并检查了基因表达位点。结果，可以检测到脚垫的表达，外周神经的背根神经节和坐骨神经。此外，在使用编码绿色荧光蛋白（GFP）的质粒DNA的类似实验中，可以通过免疫组织化学染色检测GFP的表达。为了增强基因表达，我们试图产生结合核易位信号分子和凝集素的阳离子的蛋白酶，但无法产生预期的结果。由阳离子的丙糖酶和编码荧光素酶的质粒DNA组成的Polyion络合物在骨髓（MSC）和脂肪来源的间充质干细胞（ASC）中表现出很高的荧光素酶表达。当暂时给予表达荧光素酶的MSC时，发现它们将MSC植入脊髓中并表达荧光素酶。