ネオスポラ原虫の垂直感染関連因子の同定とワクチン及び診断システムへの応用

新孢子虫原虫垂直感染相关因素的鉴定及其在疫苗和诊断系统中的应用

• 批准号: 18880003
• 负责人: 西川 義文
• 金额: $ 1.67万
• 依托单位: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18880003/
• 关键词: 感染症; 獣医学; 蛋白質; プロテオーム; 免疫学; 原虫; ネオスポラ; 流産

1.牛血清のサンプリングネオスポラ原虫抗体陽性牛のうち、流産あるいは異常産を起こした母牛および正常な出産をした母牛の血清サンプリングを実施した。当初、山形県家畜保健衛生所を介したサンプリングを予定していたがサンプル数の確保が困難だったため、宗谷家畜衛生保健所よりサンプルを確保した。2.原虫由来タンパク質と組換えタンパク質の回収プロテオームマップの作成およびELISA法の抗原に用いるために、分離精製したネオスポラ原虫NC-1株(犬から分離した世界的標準株)から可溶性タンパク質を調整した。またELISA法に用いる原虫由来組換えタンパク質として、大腸菌発現系によるNcSAG1,NcSRS2,NcGRA7の生産・精製方法を確立した。3.原虫由来組換えタンパク質を用いたELISAによる牛血清のスクリーニング上記組換えタンパク質を抗原としたELISA法により牛血清のスクリーニングを実施したところ、ネオスポラ陽性で正常出産した群と比較して、ネオスポラが感染し流産を起こした個体において抗NcGRA7抗体の上昇が確認できた。4.二次元電気泳動による虫体分泌タンパク質のマッピング回収した原虫タンパク質液を二次元電気泳動にて展開した後にタンパク質染色(クマシー染色・銀染色など)を行い、さらに画像解析を行うことでプロテオームマップを作成した。5.各分泌タンパク質のMALDI-TOF-MS分析回収した原虫タンパク質液を二次元電気泳動にて展開した後に、スクリーニングした牛血清を用いたイムノブロッテイングを行い、流産あるいは異常産を起こした母牛および正常な出産をした母牛の血清が認識する原虫由来分子を比較検証することを予定している。

1。对牛的牛血清采样，阳性新孢子原生动物抗体，对患有流产或出生异常的母牛进行血清取样，以及患有正常出生的母牛。最初，计划通过Yamagata县牲畜健康和卫生中心进行样品，但是很难确保样品的数量，因此从大豆牲畜健康中心获得了样品。 2。从分离的和纯化的新孢子蛋白NC-1菌株（一种从狗分离的全球标准菌株）中恢复原生动物衍生的和重组蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白图和可溶性蛋白。此外，已经确定了一种使用大肠杆菌表达系统的NCSAG1，NCSRS2和NCGRA7的方法，已确定为源自原生动物的重组蛋白，用于ELISA方法中。 3。当使用上述重组蛋白作为抗原筛选牛血清时，使用ELISA使用ELISA筛选牛血清，与Neospora感染的个体相比，与Neospora和Neospora阳性的人相比，抗NCGRA7抗体的增加证实了抗NCGRA7抗体的增加。 4。通过2D电泳对昆虫分泌的蛋白质的映射。收集的原生动物蛋白溶液是通过二维电泳开发的，然后进行蛋白质染色（Coomassie染色，银色染色等），并进行图像分析以创建蛋白质组图。 5。对每种分泌蛋白的MALDI-TOF-MS分析分析收集的原生动物蛋白溶液是通过二维电泳开发的，然后使用筛选的牛血清进行免疫印迹，以比较和验证原生动物衍生的分子，这些分子是由母牛的coss coss copt and copart和Abshorm coprane coRmarne and Cormorm and cormorm and coRmorm and coprorm and coprorm and coprorm and coprorm and coprorm and coprorm and coprorm and coprorm and cop and的分子。

项目成果

A 38-kDa protein from Babesia gibsoni and its antibody response in an experimentally infected dog.

来自吉氏巴贝虫的 38 kDa 蛋白质及其在实验感染狗中的抗体反应。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Vet. Parasitol. 141・3-4
• 作者: Zhou J;Zhang G;Nishikawa Y;Fujisaki K;Xuan X.
• 通讯作者: Xuan X.

Development and evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay using recombinant p23 for the detection of antibodies to Cryptosporidium parvum in cattle.

使用重组 p23 检测牛隐孢子虫抗体的酶联免疫吸附测定的开发和评估。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J. Protozool. Res. 16・1-2
• 作者: Bannai.H.;Nishikawa;Y.;Seo;J.;Nakamura;C.;zhang;S.;Kimata;I.;Takashima;Y.;Li;J.;Igarashi;I.;Xuan;X
• 通讯作者: X

Molecular characterization of a novel 32-kDa merozoite antigen of Babesia gibsoni with a better diagnostic performance by enzyme-linked immunosorbent assay

• DOI: 10.1017/s0031182007002594
• 发表时间: 2007-08-01
• 期刊: PARASITOLOGY
• 影响因子: 2.4
• 作者: Aboge, G. O.;Jia, H.;Xuan, X.
• 通讯作者: Xuan, X.

An apical membrane antigen-1 homologue from Babesia gibsoni and its antibody response in the infected dogs.

吉氏巴贝虫的顶膜抗原 1 同源物及其在受感染狗体内的抗体反应。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Exp. Parasitol. 114・4
• 作者: Zhou;J.;Yang;J.;Zhang;G.;Nishikawa;Y.;Fujisaki;K.;Xuan;X
• 通讯作者: X

Babesia gibsoni rhoptry-associated protein 1 and its potential use as a diagnostic antigen.

吉氏巴贝虫棒状体相关蛋白 1 及其作为诊断抗原的潜在用途。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Vet Parasitol. 145・1-2
• 作者: Zhou J;Jia H;Nishikawa Y;Fujisaki K;Xuan X.
• 通讯作者: Xuan X.