ヒトEC細胞の分化に伴う糖転移酵素の発現の解析-フコース転移酵素を中心に-

人EC细胞分化过程中糖基转移酶的表达分析 - 聚焦岩藻糖基转移酶 -

• 批准号: 06771363
• 负责人: 加藤 真也
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06771363/
• 关键词: 子宮体癌; フコース転移酵素; モノクローナル抗体 MSN-1; Le遺伝子; PCR-RFLP法

(目的)我々の研究質では、子宮体癌由来培養細胞株SNGIIを免疫原として作成したモノクローナル抗体MSN-1が子宮体癌組織と高率に反応することから、その認識抗原であるルイスbの構築に必要なFT-III遺伝子(=Le遺伝子)の変化についてヒトEC細胞を用いて検索してきたが、実験方法の確立を目指して、まずは各種婦人科悪性腫瘍由来の培養細胞を用いて、そのゲノムDNAにおけるLe遺伝子の点突然変異を、PCR-RFLP法を用いて検出することとした。(対象)子宮頸癌由来培養細胞株(SKGIIIa、SKGIIIb)、子宮体癌由来培養細胞株(SNGII、Hec108)、卵巣癌由来培養細胞株(RMGII、RTSG)の6細胞を用いた。(方法)各種培養細胞より抽出したゲノムDNAをテンプレートとし、FT-III遺伝子に特異的なプライマーを設定し、PCR法を行った。そのプロダクトを、制限酵素PvuIIにて切断したフラグメントの検出により、点突然変異による劣性遺伝子型の一つであるle1を検出した。さらに異なるプライマーを用いてPCRを行い、制限酵素HindIIIにて切断することで、もう1つの劣性遺伝子型le2を検出した。(結果)RMGIIは、Le/le1、RTSGは、Le/le2の各々ヘテロ接合体であり、他の4細胞はLe/Leのホモ接合体であった。(考察)癌化にともなうFT-III遺伝子の何らかの変化が示唆されていることから、leのホモ接合体である細胞株を対象とし、今回と同様のPCR-RFLP法を用いて検索することにより、in vivoでの癌化にともなう遺伝子上の変化と、それより引き起こされる表現形質の変化の解明の端緒となり得ると思われた。

（目的）在我们的研究中，使用子宫癌来源的培养细胞系SNGII作为免疫原创建的单克隆抗体MSN-1与子宫癌组织FT-III基因（=Le基因）发生高反应。施工所需），但为了建立实验方法，我们首先使用来自各种妇科恶性肿瘤的培养细胞，通过PCR检测其基因组DNA中Le基因的点突变——我们决定使用RFLP方法进行检测。 (目标)使用6种细胞：宫颈癌来源的培养细胞系(SKGIIIa、SKGIIIb)、子宫内膜癌来源的培养细胞系(SNGII、Hec108)、卵巢癌来源的培养细胞系(RMGII、RTSG)。 (方法) 以从各种培养细胞中提取的基因组DNA为模板，设定FT-III基因特异的引物，进行PCR。通过检测用限制性内切酶PvuII切割的产物片段，我们检测到了le1，这是由于点突变而导致的隐性基因型。通过使用不同引物进一步进行PCR并用限制性酶HindIII切割，检测到另一种隐性基因型le2。 (结果)RMGII为Le/le1杂合子，RTSG为Le/le2杂合子，其他4个细胞为Le/Le纯合子。 （讨论）由于癌变的结果表明 FT-III 基因发生了一些变化，因此我们使用与这次相同的 PCR-RFLP 方法进行了搜索，目标是 le 纯合的细胞系。可能是阐明与体内癌变相关的遗传变化以及这些变化引起的表型变化的开始。