RNAi法を用いた植物寄生性線虫の防除法の開発

利用RNAi方法开发控制植物寄生线虫的方法

基本信息

批准号：
05J02317
负责人：
長谷川浩一
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

逆遺伝学的解析法であるRNA干渉(RNA interference)法を用いて、日本を含む東アジアおよびヨーロッパにおいてマツに甚大な被害を与えているマツノザイセンチュウ(Bursaphelenchus xylophilus:以下、ザイセンチュウ)を植物寄生性線虫のモデルとし、標的を狙い定めたきわめて特異性の高い殺線虫法の開発に向けた基礎研究をおこなった。まずはモデル生物であり同じ線虫類のCaenorhabditis elegans(以下、エレガンス)と比較しながら、初期胚発生様式の観察をおこなった。ザイセンチュウの生殖細胞の減数分裂、および受精から2細胞期までの胚の体細胞分裂における染色体構造と行動を、DAPI染色と共焦点レーザースキャン顕微鏡によって得られた画像の3次元化によって解析した。受精後、雄性および雌性前核がそれぞれゲノム1組をもって出現し、対合・融合がおこなわれたのちに胚発生が始まる。卵母細胞のほうが精子よりも細胞質のうえでは圧倒的に大きいが、雄性前核のほうが雌性前核よりも大きかった。雄および雌の生殖細胞における減数分裂第一分裂時、受精後の前核融合時、初期胚割球の分裂中期に、染色体の数と形がはっきり確認できた。染色体の数は雌雄ともにN=6(2N=12)であった;大きさおよび形が全てほぼ同じであるため、互いの区別ができなかった。したがって、性決定様式はエレガンスのXO/XXではないと考えられる。FISH法により、rRNA領域は染色体2本(1対)の末端に位置していることがわかった。

我们使用逆向遗传分析方法RNA干扰法，以寄生线虫为模型，对对日本等东亚松树造成严重损害的松树线虫（Bursaphelenchus xylophilus）进行了研究。我们进行了基础研究，旨在开发针对特定目标的高度特异性的杀线虫方法。首先，我们通过与同样属于线虫的模式生物秀丽隐杆线虫（以下简称线虫）进行比较，观察了早期胚胎发育模式。通过 DAPI 染色和共焦激光扫描显微镜获得的图像的三维成像，分析了生殖细胞减数分裂和胚胎体细胞分裂（从受精到两细胞阶段）过程中的染色体结构和行为。受精后，雄性和雌性原核出现，各有一套基因组，配对和融合后，胚胎发育开始。卵母细胞的细胞质比精子大得多，但雄原核比雌原核大。在雄性和雌性生殖细胞的第一次减数分裂期间、受精后的原核融合期间以及早期胚胎卵裂球的中期期间，染色体的数量和形状被清楚地识别。两性的染色体数量均为 N=6 (2N=12)；它们的大小和形状都大致相同，因此无法区分。因此，性别决定模式不认为是Elegant的XO/XX。 FISH方法显示rRNA区域位于两条染色体（一对）的末端。