RNAi法を用いた植物寄生性線虫の防除法の開発

利用RNAi方法开发控制植物寄生线虫的方法

基本信息

批准号：
05J02317
负责人：
長谷川浩一
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

逆遺伝学的解析法であるRNA干渉(RNA interference)法を用いて、日本を含む東アジアおよびヨーロッパにおいてマツに甚大な被害を与えているマツノザイセンチュウ(Bursaphelenchus xylophilus:以下、ザイセンチュウ)を植物寄生性線虫のモデルとし、標的を狙い定めたきわめて特異性の高い殺線虫法の開発に向けた基礎研究をおこなった。まずはモデル生物であり同じ線虫類のCaenorhabditis elegans(以下、エレガンス)と比較しながら、初期胚発生様式の観察をおこなった。ザイセンチュウの生殖細胞の減数分裂、および受精から2細胞期までの胚の体細胞分裂における染色体構造と行動を、DAPI染色と共焦点レーザースキャン顕微鏡によって得られた画像の3次元化によって解析した。受精後、雄性および雌性前核がそれぞれゲノム1組をもって出現し、対合・融合がおこなわれたのちに胚発生が始まる。卵母細胞のほうが精子よりも細胞質のうえでは圧倒的に大きいが、雄性前核のほうが雌性前核よりも大きかった。雄および雌の生殖細胞における減数分裂第一分裂時、受精後の前核融合時、初期胚割球の分裂中期に、染色体の数と形がはっきり確認できた。染色体の数は雌雄ともにN=6(2N=12)であった;大きさおよび形が全てほぼ同じであるため、互いの区別ができなかった。したがって、性決定様式はエレガンスのXO/XXではないと考えられる。FISH法により、rRNA領域は染色体2本(1対)の末端に位置していることがわかった。

使用RNA干扰（RNA干扰），一种反向遗传分析方法，我们使用了松树线虫（Bursaphelenchus xylophilus（以下称为“ heSlophilus”），这会严重损害东亚和欧洲的松树，包括日本，包括日本，作为植物性的帕拉斯尼克人的模型，促成了parasasite nematodes的模型，并进行了靶向促成基本研究的方法。首先，我们观察了早期的胚胎形式，同时将其与模型生物和秀丽隐杆线虫（以下称为秀丽隐杆线虫）。扫描显微镜，施肥后，雄性和雌性prain核出现在一组基因组中，并在配对和融合后开始胚胎发育。在细胞质中，卵母细胞的含量比精子中的卵母细胞大，但雄性角蛋白比雌性的pr骨大。在男性和雌性生殖细胞的第一次减数分裂分裂，受精后和早期胚胎胚胎的中期期间，染色体的数量和形状清楚地得到了证实。两性的染色体数量为n = 6（2n = 12）。它们的大小和形状几乎相同，因此无法区分它们。因此，性别确定模式不被认为是优雅的XO/XX。鱼方法表明，rRNA区域位于两个染色体的末端（一对）。