癌抑制遺伝子産物Tobによる細胞増殖制御機構と細胞の癌化・老化機構の解析

抑癌基因产物Tob分析细胞增殖控制机制及细胞癌变/衰老机制

• 批准号: 15770123
• 负责人: 鈴木 亨
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770123/
• 关键词: Tob; 細胞周期; リン酸化; 増殖抑制

増殖抑制因子Tobは生理的レベルでは細胞が静止期を維持することに寄与しており、その増殖抑制活性はMAP kinaseファミリーのErkI/2によるリン酸化で制御されていることを明らかにしてきた。さらに増殖制御の分子機構を明らかにするためにTobをbaitにしたyeast two-hybrid screeningを行った。Tobのリン酸化状態に応じて相互作用が変化する因子の同定も踏まえて、baitにはTobのリン酸化型変異体、非リン酸化型変異体を利用した。その結果、転写抑制に関わる分子や新規リン酸化酵素などを単離し、実際に細胞内の過剰発現の系で相互作用することを明らかにした。今回同定した分子は、リン酸化型Tob、非リン酸化型Tobのどちらとも結合するという結果であったが、いずれの分子もTobの増殖制御とかかわりが深いと考えられ、さらに解析を進めた。Tobと転写抑制に関わる分子は細胞の増殖を強調的に抑制するということがわかった。さらに、その転写抑制に関わる分子が結合するモチーフがTobのアミノ酸配列上にも存在することが分かり、その領域に点変異を導入したTob変異体は相互作用が顕著に弱くなることが分かった。また、これらTob上の点変異はすでに相互作用することを示しているCaf1やHADCなどの分子との相互作用にも強く影響することがわかった。他方、新規リン酸化酵素との関わりでは、TobはIn vitro、及びIn vivoで新規リン酸化酵素の自己リン酸化を抑制するということ、新規リン酸化酵素のキナーゼ活性は細胞増殖抑制に必要であることを明らかにした。

生长抑制剂TOB在生理水平上有助于在静息阶段维持细胞，并且已证明其抑制活性受MAP激酶家族的ERKI/2的磷酸化调节。此外，为了阐明增殖调节的分子机制，使用TOB Bait进行了酵母两杂交筛选。考虑到鉴定其相互作用根据TOB的磷酸化状态而变化的因素，我们使用了TOB的磷酸化和非磷酸化突变体进行诱饵。结果，揭示了与转录抑制作用和新型磷光酶相关的分子被分离出来，并且它们实际上在细胞内的过表达系统中相互作用。发现这次确定的分子与磷酸化和非磷酸化的TOB结合，但是人们认为这两个分子都与TOB的生长密切相关，并进一步进行了分析。已经发现，参与转录抑制的TOB和分子强调细胞增殖。此外，发现参与转录抑制的结合分子的基序也存在于TOB的氨基酸序列上，并且将点突变引入该区域的TOB突变体的相互作用显着较弱。还发现，TOB上的这些点突变对与CAF1和HADC等分子的相互作用具有很强的影响，后者已经表明它们相互作用。另一方面，与新型的磷酸烯酶有关，已经表明，TOB在体外和体内抑制了新型磷酸烯酶的自磷酸化，并且新型磷酸烯酶的激酶活性是抑制细胞增殖所必需的。