癌抑制遺伝子産物Tobによる細胞増殖制御機構と細胞の癌化・老化機構の解析

抑癌基因产物Tob分析细胞增殖控制机制及细胞癌变/衰老机制

• 批准号: 15770123
• 负责人: 鈴木 亨
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770123/
• 关键词: Tob; 細胞周期; リン酸化; 増殖抑制

増殖抑制因子Tobは生理的レベルでは細胞が静止期を維持することに寄与しており、その増殖抑制活性はMAP kinaseファミリーのErkI/2によるリン酸化で制御されていることを明らかにしてきた。さらに増殖制御の分子機構を明らかにするためにTobをbaitにしたyeast two-hybrid screeningを行った。Tobのリン酸化状態に応じて相互作用が変化する因子の同定も踏まえて、baitにはTobのリン酸化型変異体、非リン酸化型変異体を利用した。その結果、転写抑制に関わる分子や新規リン酸化酵素などを単離し、実際に細胞内の過剰発現の系で相互作用することを明らかにした。今回同定した分子は、リン酸化型Tob、非リン酸化型Tobのどちらとも結合するという結果であったが、いずれの分子もTobの増殖制御とかかわりが深いと考えられ、さらに解析を進めた。Tobと転写抑制に関わる分子は細胞の増殖を強調的に抑制するということがわかった。さらに、その転写抑制に関わる分子が結合するモチーフがTobのアミノ酸配列上にも存在することが分かり、その領域に点変異を導入したTob変異体は相互作用が顕著に弱くなることが分かった。また、これらTob上の点変異はすでに相互作用することを示しているCaf1やHADCなどの分子との相互作用にも強く影響することがわかった。他方、新規リン酸化酵素との関わりでは、TobはIn vitro、及びIn vivoで新規リン酸化酵素の自己リン酸化を抑制するということ、新規リン酸化酵素のキナーゼ活性は細胞増殖抑制に必要であることを明らかにした。

我们已经证明，生长抑制因子 Tob 有助于在生理水平上维持细胞的静止期，并且其生长抑制活性通过 MAP 激酶家族成员 ErkI/2 的磷酸化来调节。此外，为了阐明生长控制的分子机制，我们以Tob为诱饵进行了酵母双杂交筛选。基于对相互作用随 Tob 磷酸化状态而变化的因素的鉴定，我们使用 Tob 的磷酸化和非磷酸化突变体作为诱饵。结果，他们分离出了参与转录抑制和新型磷酸化酶的分子，并揭示了它们实际上在细胞内过表达系统中相互作用。此次鉴定的分子被发现与磷酸化的Tob和非磷酸化的Tob均结合，并且这两种分子被认为与Tob增殖的控制密切相关，因此进行了进一步的分析。研究发现，Tob 和参与转录抑制的分子强烈抑制细胞增殖。此外，发现Tob的氨基酸序列中存在参与转录抑制的分子结合的基序，并且在该区域引入点突变的Tob突变体的相互作用明显较弱。我们还发现 Tob 上的这些点突变强烈影响与 Caf1 和 HADC 等分子的相互作用，这些分子已经被证明可以相互作用。另一方面，关于与新型磷酸化酶的关系，Tob在体外和体内抑制新型磷酸化酶的自身磷酸化，并且揭示了新型磷酸化酶的激酶活性对于细胞生长抑制是必需的。