細胞増殖抑制因子Tobの増殖・分化における役割とその発現制御機構の解析

细胞增殖抑制剂Tob在增殖分化中的作用及其表达调控机制分析

• 批准号: 16026211
• 负责人: 鈴木 亨
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16026211/
• 关键词: Tob; DNA損傷応答; 遺伝子発現誘導; 間葉系細胞分化; DNA損傷

増殖抑制因子Tobは細胞が静止期を維持することに関与する分子であり、また遺伝子欠損個体の解析から癌抑制遺伝子の候補であることを示す結果を得てきた。本研究においては、Tobの役割を主にtob遺伝子自身の発現調節という観点から解析を進めている。まず、マウスにおけるtob遺伝子の5'上流領域をゲノムライブラリーのスクリーニング、及びPCR法によってクローニングした。その領域の塩基配列情報をもとに、既存のデータベースを利用して、各領域に結合する転写因子の候補の検索、マッピングを行った。既に脂肪細胞の分化に伴ってtobの発現が上昇することを見い出していたが、脂肪細胞の分化に強く関与するc/EBPalphaの認識配列がtob遺伝子の5'上流領域に存在することが分かったので、実際にレポーター遺伝子をクローニングしたプロモーター領域の3'側に組み込んだベクターを構築して、レポーターアッセイを行った。その結果、c/EBPalphaはレポーター遺伝子の発現を活性化できることがわかった。また、c/EBPalphaを細胞に強制発現することで実際にtobが上昇することも確認した。その一方で、細胞に紫外線照射をしたときにもTobの発現が上昇することを見い出した。tob遺伝子の発現を抑制すると、紫外線照射に強い感受性を示したことから、TobはDNA損傷時のアポトーシスに抑制的な効果をもっており、その発現上昇は細胞死から保護し、修復機構を働かせるためのものと推測された。実際に細胞がアポトーシスを起こすときにはTobタンパク質の分解が誘導されることもわかり、Tobの細胞内での発現量の制御が細胞死と生存の選択に大きく関与していることが新たに示された。

生长抑制因子Tob是一种参与维持细胞静止期的分子，对基因缺陷个体的分析表明它是肿瘤抑制基因的候选者。本研究主要从调控tob基因本身表达的角度来分析Tob的作用。首先，通过筛选基因组文库和PCR来克隆小鼠tob基因的5'上游区域。根据该区域的核苷酸序列信息，使用现有数据库来搜索和定位与每个区域结合的转录因子的候选者。我们已经发现tob表达随脂肪细胞分化而增加，现在我们发现与脂肪细胞分化密切相关的c/EBPα的识别序列存在于tob基因的5'上游区域，因此，我们构建了tob基因。将报告基因整合到克隆启动子区域 3' 侧的载体，并进行报告基因分析。结果表明c/EBPalpha可以激活报告基因的表达。我们还证实，细胞中 c/EBPα 的强制表达实际上增加了 tob。另一方面，他们还发现，当细胞受到紫外线照射时，Tob 表达量增加。抑制tob基因的表达对紫外线照射表现出强烈的敏感性，表明Tob对DNA损伤时的细胞凋亡具有抑制作用，并且推测增加表达对于防止细胞死亡和激活修复机制是必要的。还发现，当细胞真正发生凋亡时，Tob蛋白的降解被诱导，这新表明细胞内Tob表达水平的控制在很大程度上参与了细胞死亡和生存的选择。