細胞増殖抑制因子Tobの増殖・分化における役割とその発現制御機構の解析

细胞增殖抑制剂Tob在增殖分化中的作用及其表达调控机制分析

• 批准号: 16026211
• 负责人: 鈴木 亨
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16026211/
• 关键词: Tob; DNA損傷応答; 遺伝子発現誘導; 間葉系細胞分化; DNA損傷

増殖抑制因子Tobは細胞が静止期を維持することに関与する分子であり、また遺伝子欠損個体の解析から癌抑制遺伝子の候補であることを示す結果を得てきた。本研究においては、Tobの役割を主にtob遺伝子自身の発現調節という観点から解析を進めている。まず、マウスにおけるtob遺伝子の5'上流領域をゲノムライブラリーのスクリーニング、及びPCR法によってクローニングした。その領域の塩基配列情報をもとに、既存のデータベースを利用して、各領域に結合する転写因子の候補の検索、マッピングを行った。既に脂肪細胞の分化に伴ってtobの発現が上昇することを見い出していたが、脂肪細胞の分化に強く関与するc/EBPalphaの認識配列がtob遺伝子の5'上流領域に存在することが分かったので、実際にレポーター遺伝子をクローニングしたプロモーター領域の3'側に組み込んだベクターを構築して、レポーターアッセイを行った。その結果、c/EBPalphaはレポーター遺伝子の発現を活性化できることがわかった。また、c/EBPalphaを細胞に強制発現することで実際にtobが上昇することも確認した。その一方で、細胞に紫外線照射をしたときにもTobの発現が上昇することを見い出した。tob遺伝子の発現を抑制すると、紫外線照射に強い感受性を示したことから、TobはDNA損傷時のアポトーシスに抑制的な効果をもっており、その発現上昇は細胞死から保護し、修復機構を働かせるためのものと推測された。実際に細胞がアポトーシスを起こすときにはTobタンパク質の分解が誘導されることもわかり、Tobの細胞内での発現量の制御が細胞死と生存の選択に大きく関与していることが新たに示された。

生长抑制剂TOB是一种参与维持细胞静息阶段的分子，对基因缺陷个体的分析也表明，它是肿瘤抑制基因的候选者。在这项研究中，从调节TOB基因本身的表达的角度分析了TOB的作用。首先，通过筛选基因组文库和PCR来克隆小鼠中TOB基因的5'上游区域。基于该区域的核苷酸序列信息，现有数据库用于搜索和绘制候选者的转录因子与每个区域结合的转录因子。尽管已经发现，TOB的表达随脂肪细胞的分化增加，但发现C/eBpalpha的识别顺序强烈与脂肪细胞分化相关，存在于TOB基因的5'上游区域中，因此在该媒介中构建了一个载体，该媒介实际上是在该媒介中构建了记者基因的攻击者，并逐渐被宣传员。结果表明C/EBPALPHA可以激活报告基因的表达。还可以证实，细胞中C/EBPALPHA的强迫表达实际上增加了TIB。另一方面，发现当细胞用紫外线辐照细胞时，TOB的表达增加了。当抑制TOB基因的表达时，它非常容易受到紫外线照射的影响，并且推测TOB对DNA损伤期间的凋亡有抑制作用，并且其表达受到细胞死亡的保护并在修复机制上作用。还发现，当细胞实际发生凋亡，诱导TOB蛋白的降解时，新近表明的是，细胞内TOB表达水平的调节很大程度上与选择细胞死亡和存活有关。