血管傷害の新しいバイオマーカーの探索と診断法の開発

寻找新的血管损伤生物标志物并开发诊断方法

• 批准号: 16659195
• 负责人: 鈴木 亨
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16659195/
• 关键词: プロテオミクス; バイオマーカー

本研究では、血管疾患の新しい血液診断マーカーの探索研究のシーズとして、血管傷害の血液診断マーカーを探索し、アッセイ系を開発し、臨床応用への基盤となる研究を行うことが目的である。そのために、血管傷害時に血管壁から血中に放出される蛋白質を単離・同定し、さらにその知見をもとに診断アッセイを開発するための研究基盤ならびに技術を構築する。質量分析計で血中蛋白質を単離同定する。単に血液サンプルを質量分析計で包括的に解析するのではなく、differential proteomics法という二つのサンプルを分画しながら差を検討する方法を用いる。上記検討を実施した。検討には、SELDI TOF-MS機ならびにMALDI-TOF-MS機を用いた。SELDI TOF-MS機は、血清を種々の表面加工された測定用マトリックス(プロテイン・チップ)にアプライし、分画することが可能である。陽イオン、陰イオン等、クロマト担体様に加工されたプレートにサンプルをアプライし、また吸着、洗浄方法を複数設定することで256通り以上の条件について検討した。血管傷害のモデルを用いたが、血管傷害時に出現するピーク、減少するピークを複数同定することに成功した。しかしながら、これらのピークは個人間の多様性の程度と比し、判別困難な面があった。条件設定を含めて、ヒトサンプルを用いた際の多様性の問題を克服するために、種々の検討を行ったが、決定的なデータが得られる段階までは残念ながら至らなかった。今後、方法論をさらに改良する必要がある。一方、上記の包括的なアプローチの他に、焦点を絞った狙い撃ち的なアプローチも導入した。血管壁に存在し、血管傷害時に血中に流出されると考えられる蛋白質を選択し、これらに対するイムノアッセイ等を開発した。過去に平滑筋ミオシン重鎖に対する測定系を開発し、大動脈解離症の診断において有用であることを示したが、他マーカーについても検討した結果、臨床応用が期待できるマーカーを同定できた。

这项研究的目的是探索血管损伤，开发测定系统的血液诊断标志物，并进行研究，这是临床应用的基础，作为血管疾病的新血液诊断标志物的参考。为此，我们将建立一个研究基础和技术，以隔离和鉴定血管损伤期间从血管壁中释放到血液中的蛋白质，并根据这一发现进行诊断测定。使用质谱仪分离并鉴定血蛋白。我们不使用质谱仪对血液样本进行全面分析，而是使用一种称为差异蛋白质组学的方法，该方法涉及分馏两个样品以检查差异。上述研究进行了。 Seldi Tof-MS和Maldi-Tof-MS机器用于研究。 Seldi TOF-MS机器能够将血清涂在各种表面处理的测量矩阵（蛋白质芯片）中。将样品应用于以色谱载体方式处理的板，例如阳离子和阴离子，并且还设置了多种吸附和清洁方法，以检查256个或更多条件。尽管使用了血管损伤模型，但我们能够鉴定出在血管损伤过程中出现并减少的多个峰。但是，与个体之间的多样性程度相比，这些峰很难区分。在使用人类样本（包括设置条件）时，进行了各种研究以克服多样性问题，但不幸的是，我们无法达到可以获得结论性数据的阶段。将来需要进一步改进该方法。另一方面，除了上述综合方法外，我们还引入了一种集中的，有针对性的方法。选择了血管壁损伤期间血管壁中存在并被认为在血液中泄漏到血液中的蛋白质，并开发了免疫测定。过去，我们已经开发了一种用于平滑肌肌球蛋白重链的测量系统，并表明它在诊断主动脉夹层方面很有用，但是由于检查了其他标记，我们已经能够识别可以预期具有临床应用的标记。