NUMBの局在を指標とした脊椎動物の神経発生過程での非対称分裂の解析

以 NUMB 定位为指标分析脊椎动物神经发生过程中的不对称分裂

基本信息

批准号：
13210009
负责人：
若松義雄
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13210009/
关键词：
幹細胞非対称分裂神経分化 NUMB

项目摘要

本研究の主要課題のひとつは、非対称分裂のメカニズムについて理解を深めることにある。中間径繊維の一種であるTransitinはNumbとともに分裂中の神経系幹細胞で非対称に局在し、不等分配される。今年度の研究により、外来Transitin-GFPが内在性のTransitinと同様に非対称に局在できることがわかった。また、Transitinの断片を過剰発現することにより、Numbの非対称な細胞内局在が壊されることがわかった。このことは、TransitinがNumbの細胞内分布を制御していることを示していると考えられた。本研究のもう一つの課題は、脊椎動物の神経系幹細胞における非対称分裂のプロセスをライムラプス観察することである。これまでに、培養細胞をタイムラプス観察するシステムのセットアップを行ない、神経堤細胞にNumb-GFP融合タンパク質の発現ベクターを導入して、Numb-GFPが不等分配されるようすを観察することに成功した。これは、神経堤細胞の非対称分裂のプロセスを記録した世界でも最初の例となった。また、中枢神経系の幹細胞の非対称分裂を観察できるようにするために、鳥類胚の大脳スライス培養を行ない、導入したGFPの発現でスライス内での細胞のふるまいを観察できるようにした。現在はNumb-GFPやTransitin-GFPの局在を指標にして、スライス培養下での神経幹細胞の非対称分裂を観察、記録することを試みている。

这项研究的主要挑战之一是加深我们对不对称分裂机制的理解。转运蛋白是一种类型的中间纤维，是不对称的，并分散在神经系统干细胞中用麻木。今年的研究发现，外国Transitin-GFP可以不对称地定位，类似于内源性转运蛋白。还发现过表达转运蛋白片段会破坏麻木的不对称亚细胞定位。人们认为这表明转介蛋白调节麻木的细胞内分布。这项研究中的另一个挑战是观察脊椎动物神经干细胞中不对称分裂过程的莱姆植物失误。迄今为止，我们已经成功地建立了一个用于延时观察培养细胞的系统，并将麻木GFP融合蛋白的表达矢量引入了神经crest细胞中，以观察Numb-GFP的不平等分布。这是世界上第一个记录神经rest细胞不对称分裂过程的过程。此外，为了观察中枢神经系统干细胞的不对称分裂，培养了禽类胚胎的脑切片，以通过表达引入的GFP的表达来观察切片中细胞行为。目前，我们正在尝试使用Numb-GFP和Transitin-GFP的定位作为指标来观察并记录切片培养的神经干细胞的不对称分裂。