ホメオドメイン転写因子SIX1の血液細胞周期および分化制御機構

同源域转录因子SIX1的血细胞周期和分化控制机制

基本信息

批准号：
13043045
负责人：
池田啓子
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Jichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13043045/
关键词：
SIX1 細胞周期血球分化マイクロアレイ細胞増殖

项目摘要

転写因子Sixタンパク質の細胞周期への役割を明らかにすることを目的とした。成果(1)血球細胞分化Lineageに伴うSIX1発現の消長。成人骨髄から、造血幹細胞を採取し、種々の薬剤により分化を誘導した場合に内因性SIX1発現の変化をRT-PCR法にて検証した。SIX1は未分化細胞で少量発現し、赤血球、巨核球いずれの分化系列においても、分化刺激後2日目でその発現が増加し、4日目で多少低下した後、6日目で、再び発現が顕著に増大した。なお、細胞は分化刺激後6日目においては、分化系列が進行する一方、増殖能も増加していた。成果(2)血球系細胞株における発現。HL60(C)細胞株では増殖培地下で強発現が観察された。HL60(C)はPDBuまたはAraCにより分化を誘導し、誘導開始後1,2,3,4日目の細胞からmRNAを調製しノザン法にてSIX1の発現量を調べた。分化誘導・増殖能消失と同時に顕著にSIX1の発現レベルが顕著に低下した。この現象は赤血球、巨核球等の分化系譜にはよらなかった。これらの細胞株は、分化とともに増殖能が低下する。成果(3)血球系細胞株へのSIX1の強制発現による増殖能の変化。SIX1の強発現に用いる、野生型および、DNA結合能を欠く変異型を作成し、K562細胞に形質転換を行った。この際、SIX1遺伝子産物を発現する細胞は、同時にGFP遺伝子産物を発現させ、GFP陽性細胞群について、細胞周期を調べた。SIX1の強制発現により、S期の優位な増加が観察された。DNA結合能を欠く変異型SIX1も野生型と同程度のS期の優位な増加が観察された。さらに細胞同士の接着性の増加が観察された。成果(4)標的遺伝子の同定。野生型SIX1の強制発現株のマイクロアレイにより、種々のサイトカインや接着因子の有意な発現増強が観察された。

目的是阐明转录因子六蛋白在细胞周期中的作用。结果（1）与血细胞分化谱系相关的六1表达下降。从成年骨髓中收集造血干细胞，并通过各种药物诱导分化时，内源性SIX1表达的变化通过RT-PCR验证。 SIX1在未分化的细胞中以少量表达，在分化红细胞和巨核细胞的分化系列中，其表达在分化刺激后的第二天增加，在第四天略有下降，然后在第六天再次显着增加。顺便说一句，细胞的分化序列在分化刺激后的第6天进行，但它们的增殖能力提高了。结果（2）在血细胞系中的表达。在生长培养基下的HL60（C）细胞系中观察到了强表达。诱导HL60（C）与PDBU或ARAC分化，并在启动诱导后的第1、2、3和4天从细胞中制备mRNA，并使用北方方法检查了SIX1的表达水平。在诱导分化和增殖能力丧失的同时，SIX1的表达水平显着降低。这种现象不会影响红细胞，巨核细胞等的分化谱系。这些细胞系具有分化的增殖能力降低。结果（3）由于SIX1强迫表达在血细胞系中的强迫表达而导致增生能力的变化。缺乏DNA结合能力的野生型和突变体是为了强烈表达SIX1，并转化为K562细胞。目前，表达SIX1基因产物的细胞同时表达GFP基因产物，并检查了细胞周期的GFP阳性细胞。由于强迫表达六1，S相的显着增加。还观察到了与缺乏DNA结合能力的野生型突变体Six1相似的S相的主要增加。此外，观察到细胞粘附的增加。结果（4）鉴定靶基因。通过野生型SIX1的强迫表达菌株的微阵列观察到了各种细胞因子和粘附因子表达的显着增强。