レンチウイルスベクターによるHIV感染症の遺伝子治療

使用慢病毒载体治疗 HIV 感染的基因治疗

基本信息

批准号：
13015201
负责人：
中内啓光
金额：
$ 1.47万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13015201/
关键词：
エイズ HIV レンチウイルスベクター遺伝子治療造血幹細胞 CCR5 細胞内抗体

项目摘要

本研究は造血幹細胞をターゲットとしたHIV感染症の遺伝子治療を目的とする。具体的には、HIVのCCR5コレセプターに対する細胞内抗体遺伝子を造血幹細胞に導入し移植することにより、幹細胞由来のすべての血液細胞内で抗原抗体反応がおこり、CCR5が細胞表面に発現されないためHIVの感染増殖が阻害されることを期待するものである。すでに米国の共同研究者が、抗CCR5細胞内抗体をCCR5陽性T細胞株(PM1)に発現させることによりin vitroでHIVの増殖を阻害することに成功している。一方、近年まで造血幹細胞への遺伝子導入は非常に困難であったが、レンチウイルスベクターの開発により造血幹細胞をターゲットとした遺伝子治療が現実的なものとなってきている。そこで、臨床応用に向けてベクターの安全性を高めるため、パッケージングコンストラクトからtat, vif, vpr, vpu, nef遺伝子を除き、ベクターのLTRプロモーター活性をなくした第3世代ベクターを作製した。このベクターは、ヒト造血幹細胞にサイトカインによる増殖刺激なしで、これまでのベクターと同等以上に高い効率で遺伝子導入できることがNOD/SCID免疫不全マウスを用いたin vivoの系で確認された。さらに第3世代ベクターは、ヒトよりもはるかに純度の高いマウス造血幹細胞にも高い効率で遺伝子導入できること、WPRE(woodchuck hepatitis virus posttranscriptionol regulatory element)を挿入したベクターでは発現レベルが飛躍的に上昇すること、cPPT(central polypurine tract)sequenceを挿入することにより導入効率が上がることがわかった。また、CMV,PGK, EF-1α各プロモーターを比較検討した結果、EF-1αが最もすぐれていることが判明した。現在、抗CCR5細胞内抗体遺伝子を組み込んだ第3世代レンチウイルスベクターを作製し、臨床応用の前段階としてサルを用いたin vivoでの抗HIV効果を検討中である。

这项研究旨在针对靶向造血干细胞的HIV感染基因治疗。具体而言，可以预期，通过引入和移植HIV的CCR5共受体的细胞内抗体基因中，在从干细胞中得出的所有血细胞中都会发生抗原抗体反应，并且CCR5在细胞表面没有表达CCR5，因此抑制了HIV的感染和繁殖。美国的合作者已经通过表达CCR5阳性T细胞系中的抗CCR5细胞内抗体（PM1）来抑制体外HIV增殖。另一方面，直到最近，基因转移到造血干细胞一直非常困难，但是随着慢病毒载体的发展，靶向造血干细胞的基因疗法已经变得更加现实。因此，为了提高向量对临床应用的安全性，制备了第三代载体，其中通过从包装构建体中删除TAT，VIF，VPR，VPR和NEF基因来消除载体的LTR启动子活性。使用点头/scID免疫缺陷小鼠在体内系统中证实，该载体可以将其转移到人类造血干细胞中，其效率比以前的载体更高，而不会刺激细胞因子的增殖。 Furthermore, it was found that the third generation vector can be transferred to mouse hematopoietic stem cells with a much more purity than humans with high efficiency, that the expression level is dramatically increased in vectors with insertion of a woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element (WPRE) and that insertion of a central polypurine tract (cPPT) sequence increases the efficiency of transduction.此外，在比较和检查了CMV，PGK和EF-1α的启动子之后，发现EF-1α是最好的。目前，我们创建了第三代慢病毒载体，该载体载体结合了抗CCR5细胞内抗体基因，目前正在研究使用猴子作为临床应用的阶段前的体内抗HIV效应。