標的分子であるTBPに結合した転写活性化ドメインの立体構造解析

与靶分子TBP结合的转录激活域的三维结构分析

基本信息

批准号：
13014214
负责人：
古久保哲朗
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13014214/
关键词：
転写因子基本転写因子転写制御転写転写調節機構構造解析 TFIID TAF

项目摘要

転写制御機構を理解するためには、転写活性化ドメイン(AD)とその標的分子の間に成立する蛋白質間相互作用の実体を明らかにする必要がある。われわれはTFIIDサブユニットであるyTAF145/dTAF230のN末端にTBPと極めて強く結合し、その機能を阻害する活性領域(TAND)を同定し、TANDが役割分担の異なる二個の小サブドメイン(TAND1,TAND2)から構成されること、TAND1はADと多くの機能的な共通点を持つことなどを明らかにしてきた。またすでにIkuraらにより、ショウジョウバエ由来のdTAND1がTATAボックスの分子擬態を利用してTBPに結合していることも明らかにされている。今年度は、出芽酵母細胞内においてdTANDを有するyTAF145蛋白質の発現を試みると、そのほとんどがTAND領域を欠失した形で発現するか、その原因の少なくとも一部はdTANDに含まれるコドンの使用頻度によることを見いだした。すなわちdTANDをN末端に有するyTAF145蛋白質の場合、翻訳開始点が通常の開始メチオニンよりも下流側へシフトしており、このシフトはコドンを出芽酵母において使用頻度の高いものへ変換することにより解消された。従ってdTANDを含むyTAF145蛋白質が全長で発現できない理由は、コードされるキメラ型TAF145の活性が細胞に対して何らかの悪影響を及ぼした結果というよりも、むしろリボソーム固有の一般的な性質によるものと考えられる。そこであらためてコドンを最適化したyTAF145変異体を用いて再検討を行ったところ、dTAND2にはyTAND2様の活性が確認されたが、dTAND1にはyTAND1としての活性は認められず、むしろ酵母の生育に対して阻害効果を示すことが明らかとなった。

为了理解转录控制机制，有必要阐明转录激活域（AD）与其靶分子之间发生的蛋白质-蛋白质相互作用的实质。我们在 TFIID 亚基 yTAF145/dTAF230 的 N 末端发现了一个活性区域 (TAND)，它与 TBP 结合极强，并抑制其功能。已表明 TAND1 由 TAND2 组成，并且 TAND1 与 TAND1 有许多功能相似之处。广告。此外，Ikura 等人已经揭示，果蝇衍生的 dTAND1 利用 TATA 盒的分子模拟与 TBP 结合。今年，当我尝试在酿酒酵母细胞中用dTAND表达yTAF145蛋白时，大多数蛋白都是在TAND区域被删除的情况下表达的，或者至少部分原因是dTAND中密码子使用的频率，我发现这是这样的。由于以下原因。换句话说，对于在 N 末端具有 dTAND 的 yTAF145 蛋白，翻译起始点从正常起始蛋氨酸向下游移动，并且可以通过将密码子转换为常用密码子来解决这种移动。在酿酒酵母Ta中。因此，含有dTAND的全长yTAF145蛋白不能表达的原因被认为是由于核糖体固有的一般特性，而不是编码的嵌合TAF145的活性对细胞产生任何不利影响的结果。因此，我们重新检查了密码子优化的yTAF145突变体，发现dTAND2具有yTAND2样活性，但dTAND1不具有yTAND1活性，反而被发现对酵母生长具有抑制作用。影响于