基本転写因子TFIIDに支配される標的遺伝子群の網羅的単離とそのプロモーター特性

全面分离基本转录因子TFIID控制的靶基因及其启动子特征

基本信息

  • 批准号:
    15013247
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 3.33万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    2003
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2003 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

コアプロモーター構造を認識する基本転写因子TFIIDは、転写調節因子から受け取った信号を転写量の増減へと変換する上で中心的な役割を果たす。我々はTAF1のTBP機能阻害領域TANDがTFIIDによる転写活性化の分子スイッチとして機能する可能性を示すとともに、コアプロモーターの認識能に異常をきたすtaf1点変異体を複数単離し(N568Δ,T657K)、その解析を進めてきた。TFIIDを含む普遍的転写因子間の機能的ネットワークの実体を明らかにしていくためには、それぞれの標的遺伝子を網羅的に単離するというゲノム生物学的手法が極めて有効である。今年度は、昨年度までにDNAチップ法を用いて同定したTANDの標的遺伝子の一つであるHIS4について、制限温度下における転写量減少の分子機構について詳しい解析を行った。その結果、TAND欠失により(1)転写調節因子BAS1からRNAポリメラーゼIIへの転写活性化シグナルの伝達効率が著しく低下すること、及び(2)BAS1の有する二種類の転写活性化ドメイン(AD)のうち、C端側に存在するADからのシグナルが特異的に阻害されることが明らかとなった。またDNAチップ法により同定した数百個の標的遺伝子のプロモーター解析を効率よく行うため、ポリリン酸の蓄積量を指標に遺伝子発現量を非破壊的にモニタリングする新規ハイスループット型プロモーターマッピング法について検討を行った。その結果、転写オフのキネティックスをレスポンス良く測定できるレポーター遺伝子の開発と、この系を組み込んだ酵母を^<31>P-NMR測定用トレイに自動的に整列させるためのコロニースポッターの開発に成功した。
识别核心启动子结构的基本转录因子 TFIID 在将从转录调节因子接收到的信号转化为转录水平的变化方面发挥着核心作用。我们证明了TAF1的TBP功能抑制区TAND可能作为TFIID转录激活的分子开关,并且我们还分离了多个在核心启动子识别能力方面表现出异常的taf1点突变体(N568Δ,T657K)。分析。为了阐明包括TFIID在内的通用转录因子之间的功能网络的本质,全面分离每个靶基因的基因组生物学方法是非常有效的。今年,我们对去年利用DNA芯片方法鉴定出的TAND靶基因之一HIS4在限制性温度条件下转录水平降低的分子机制进行了详细分析。结果,TAND缺失显着降低了转录调节因子BAS1到RNA聚合酶II的转录激活信号的传递效率,并且(2)BAS1中的两类转录激活结构域(AD)被揭示。来自 C 末端侧的 AD 信号被特异性抑制。此外,为了有效地分析使用DNA芯片方法鉴定的数百个目标基因的启动子,我们正在考虑一种新的高通量启动子作图方法,该方法以累积的多磷酸盐的量为指标,无损地监测基因表达。去了。结果,我们开发了能够以良好的响应测量转录动力学的报告基因,以及自动将结合该系统的酵母与 31 P-NMR测量托盘对准的菌落点测仪。

项目成果

期刊论文数量(10)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kobayashi, T.Kokubo, Y.Ota, S.Yokoyama: "Promoter-specific function of the TATA element in undifferentiated P19 cells."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 310・2. 458-463 (2003)
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  • 发表时间:
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  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
S.Takahata, H.Ryu, K.Ohtsuki, K.Kasahara, M.Kawaichi, T.Kokubo: "Identification of a novel TATA element-binding protein binding region at the N terminus of the Saccharomyces cerevisiae TAF1 protein."Journal of Biological Chemistry. 278・46. 45888-45902 (20
S.Takahata、H.Ryu、K.Ohtsuki、K.Kasahara、M.Kawaichi、T.Kokubo:“鉴定酿酒酵母 TAF1 蛋白 N 末端的新型 TATA 元件结合蛋白结合区域。”生物化学278・46.
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  • 发表时间:
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  • 影响因子:
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  • 作者:
  • 通讯作者:
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  • 发表时间:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
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  • 发表时间:
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  • 作者:
  • 通讯作者:
S.Takahata, K.Kasahara, M.Kawaichi, T.Kokubo: "Autonomous function of the amino-terminal inhibitory domain of TAF1 in transcriptional regulation."Molecular and Cellular Biology. 24・8(in press). (2004)
S.Takahata、K.Kasahara、M.Kawaichi、T.Kokubo:“TAF1 氨基末端抑制域在转录调控中的自主功能”。《分子与细胞生物学》24·8(出版中)。
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知道了