細胞分裂制御キナーゼの分子連携とその調節異常による腫瘍形成機構

细胞分裂控制激酶的分子协调及其失调引起的致瘤机制

• 批准号: 01J00391
• 负责人: 広田 亨
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J00391/
• 关键词: 細胞分裂; 分裂期キナーゼ; Aurora-A; リン酸化; 中心体; RNAi; Ajuba; LIMドメイン; 短鎖RNA干渉法; 染色体不安定性; キネトコア; CENP-A; 細胞分裂; 分裂期キナーゼ; Aurora-A; リン酸化; 中心体; RNAi; Ajuba; LIMドメイン; 短鎖RNA干渉法; 染色体不安定性; キネトコア; CENP-A

Auroraキナーゼは進化上高度に保存されている普遍的な分裂期キナーゼである。本研究は、詳細が不明であったAurora-Aの生理機能について調べ、ヒトの細胞分裂のメカニズムに迫ることを主題とした。本年度は、昨年度までに同定したAurora-Aの会合分子について、引き続き、それらの相互作用の解析を行った。さらに、最終年度として、これまでの結果を論文発表することも目標とした。以下に、本年度の成果を要約する。(1)Aurora-Aは分裂期進入のための必須子である:リン酸化部位認識特異抗体を用いることにより、Aurora-Aの活性化がG2後期の中心体において始まることを見出した。そこで、RNAi法を用いてAurora-Aの発現を抑制したところ、HeLa細胞はG2期で停止し分裂期への進入が著しく損なわれた。細胞分裂の開始に際しCyclinB1-Cdk1の活性化が中心的な役割を持つと考えられ、その最初の活性化は中心体で起こるが、我々はG2期後期においてAurora-Aが中心体で活性化することが、つづくCyclinB1-Cdk1の活性化に必要であることを示した。(2)AjubaはAurora-Aの自己リン酸化による酵素活性化を誘導する:Aurora-Aの会合分子としてヒトAjubaを同定した(GenBank Acc.No.AY169959)。Ajubaは3つのLIMドメインをもつタンパク質であり、LIM2およびLIM3を介してAurora-Aと結合することを見出した。分裂期においてAurora-AはAjubaと結合することで自己リン酸化を引き起こし、活性化することが明らかになった。AjubaはG2後期の中心体におけるAurora-Aの活性化を誘導する必須の調節因子であることが分かった。

Aurora激酶是高度保守的普遍有丝分裂激酶，在进化上是高度保守的。这项研究的重点是研究Aurora-A的生理功能，该功能没有细节，以及人类细胞分裂的机制。今年，我们继续分析到去年鉴定出的Aurora-A分子的相互作用。此外，目标是将论文作为最后一年。以下是今年结果的摘要。 （1）Aurora-A是有丝分裂输入的必不可少的成分：通过使用磷酸化位点识别特异性抗体，我们发现Aurora-A的激活始于晚期G2中心体。因此，当使用RNAi方法抑制Aurora-A表达时，在G2阶段停止了HeLa细胞，并将进入有丝分裂相的进入显着损害。人们认为，在细胞分裂开始时cyclinb1-cdk1的激活，尽管初始激活发生在中心体中，但我们表明，在G2晚期，Aurora-A的激活对于cyclinb1-cdk1的持续激活是必需的。 （2）Ajuba通过Aurora-A：人Ajuba的自磷酸化诱导酶活性，被鉴定为Aurora-A的缔合分子（GenBankACC。E.AY169959）。 Ajuba是一种具有三个LIM结构域的蛋白质，发现通过LIM2和LIM3与Aurora-A结合。发现Aurora-A与Ajuba结合并激活自磷酸化。发现Ajuba是一种必不可少的调节剂，可在G2晚期中心体中诱导Aurora-A的激活。