ポリADPリボシル化修飾による染色体分配の制御

通过聚 ADP 核糖基化修饰控制染色体分离

基本信息

批准号：
18657064
负责人：
広田亨
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ポリADPリボシル(PAR)化修飾が分裂期スピンドルの制御における重要性を明らかにすることを目的とした。先ず、PAR化修飾特異的な抗体を用いたウエスタンブロットによりPAR修飾を受けたタンパク質をスメア状に検出することに成功し、このPARスメアが分裂期では間期と比し約8倍に上昇することを見出した。この抗体を用いて細胞染色を行うと、紡錘体極、紡錘体、動原体が特異的に染色され、分裂装置にPAR化修飾を受けるタンパク質が分布することが示唆された。次いで、分裂期PAR修飾を触媒するPARPを明らかにするために、候補となるPARP酵素に対してRNAiをおこない、PAR化タンパク質の変化を検討した。その結果、TankyraseというPARPをノックダウンすると分裂期微小管の動態に異常を来すことが判明した。つまり、Tankyraseのノックダウンした細胞では、紡錘体の形態が崩れ、正常に機能できないため、染色体は両方構成を獲得しないまま分裂期に停滞する。興味深いことに、Tankyraseのノックダウン細胞におけるPAR化修飾の変化を調べたところPAR化修飾の総量には大きな変化は見られず、紡錘体極と紡錘体のPAR化修飾は観察できたものの、動原体のそれは有意に低下していた。このことより、Tankyraseが動原体のタンパク質のPAR化修飾を特異的に触媒し、動原体の機能、ひいては紡錘体の機能に重要な役割を担っている可能性があると考えられ、現在、動原体におけるPAR化基質の同定を試みている。また不思議なことに、Tankyraseのノックダウン細胞では姉妹染色分体の早期分離を起こすが、紡錘体チェックポイントとコヒーシンの解離との関連性についても詳細に調べている。

这项研究旨在阐明多ADP核糖基（PAR）诱导的修饰在有丝分裂纺锤体的调节中的重要性。首先，我们通过使用特异性抗体修饰的抗体来成功地以涂片状的方式检测了PAR修饰的蛋白质，并发现与有丝分裂相相比，PAR涂片增加了约8倍。使用该抗体进行细胞染色表明，主轴杆，纺锤体和丝粒体被明确染色，这表明接受PAR修饰的蛋白质分布在有丝分裂装置中。接下来，为了阐明催化有丝分裂PAR修饰的PAR，对候选PARP酶进行了RNAi，并检查了PAR形成蛋白的变化。结果，发现击倒一个称为坦克酶的PARP引起有丝分裂微管动力学的异常。换句话说，在被坦克酶撞倒的细胞中，纺锤体的形态被破坏并且无法正常工作，因此染色体在有丝分裂阶段停滞不前而没有获得两个组合物。有趣的是，当我们研究罐式敲低细胞中的分类修饰的变化时，在形成型修饰的总数中未发现显着变化，尽管观察到了纺锤极和纺锤体中的分类修饰，但丝粒物质显着降低。由此，可以认为坦克酶特异性催化了动脉粥样硬化蛋白的套筒修饰，并可能在动力学功能中起重要作用，进而在纺锤体功能中起重要作用，目前正在尝试识别动力学中的脱层底物。奇怪的是，坦克酶敲低的细胞会引起姐妹染色质的早期分离，但是还详细研究了主轴检查点与粘着蛋白解离之间的关联。