Aurora-Aキナーゼ過剰発現マウスによる悪性脳腫瘍発生モデルの作製

使用过表达 Aurora-A 激酶的小鼠创建恶性脑肿瘤发展模型

基本信息

批准号：
16659391
负责人：
佐谷秀行
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Auroraは酵母から哺乳類まで高度に保存されたセリン・スレオニンキナーゼで正確な細胞分裂を行うための必須分子として同定された。ヒトではAurora-A,-B,-Cの3つのホモログが同定されているが、特にAurora-Aは脳腫瘍、乳癌、大腸癌などにおいて遺伝子レベルでの増幅と、タンパク質レベルでの過剰発現が高頻度に生じており、癌化との関連が注目されている。また、私たちはAurora-Aの野生型または酵素不活性型を安定発現したRat1線維芽細胞を樹立し種々の観察を行った結果、野生型Aurora-A発現細胞でのみ軟寒天培地内コロニー形成能、フォーカス形成能、ヌードマウスでの生着を認め、形質転換にはキナーゼ活性が必要であることを確認している。これらの所見からAurora-Aは新たな癌遺伝子と考えられ、脳腫瘍の発生及び悪性化にも関わっている可能性が強く疑われる。本研究は組織特異的にAurora-Aキナーゼを発現するトランスジェニックマウスを作製し、個体レベルでAurora-Aキナーゼの過剰発現と悪性腫瘍形成との関連を調べることを目的として行った。以下に本年度の成果を要約する。1)乳腺特異的にAurora-Aキナーゼを過剰発現したマウスでは2核細胞の出現を高頻度に見たが、その後細胞はアポトーシスに陥るため、長期間の観察において(15ヶ月以上)癌化は観察されなかった。しかし、そのアポトーシスはp53に依存していることが明らかになったため、p53ノックアウトマウスと交配したところ、約10ヶ月で腫瘍性の変化が乳腺に出現した。2)乳腺同様にグリア特異的および皮膚特異的にAurora-Aが発現するトランスジェニックマウスを構築し、現在分裂期の異常、腫瘍化などの観察をおこなっている。また、これらのマウスもp53ノックアウトマウスと交配し、組織特異的な変化が見られるか否かについて観察中である。

Aurora 是一种丝氨酸-苏氨酸激酶，从酵母到哺乳动物都高度保守，已被确定为精确细胞分裂的重要分子。 Aurora-A、-B和-C的三种同源物已在人类中鉴定出来，特别是Aurora-A在脑肿瘤、乳腺癌、结直肠癌等中在基因水平上高度扩增并在蛋白质水平上过度表达。它经常发生，其与癌症的关系正引起人们的关注。此外，我们建立了稳定表达野生型或酶失活形式的 Aurora-A 的 Rat1 成纤维细胞，并进行了各种观察。结果，我们发现只有表达野生型 Aurora-A 的细胞在软琼脂培养基中形成集落。活性、病灶形成能力和在裸鼠中的植入，证实了转化需要激酶活性。基于这些发现，Aurora-A被认为是一种新的癌基因，强烈怀疑它可能与脑肿瘤的发生和恶性有关。本研究的目的是产生以组织特异性方式表达Aurora-A激酶的转基因小鼠，并在个体水平上研究Aurora-A激酶的过度表达与恶性肿瘤形成之间的关系。今年的结果总结如下。 1）在乳腺中特异性过度表达Aurora-A激酶的小鼠中，经常出现双核细胞，但细胞随后发生凋亡，因此长期观察（超过15个月）未观察到癌变。然而，很明显细胞凋亡依赖于p53，因此当小鼠与p53敲除小鼠杂交时，大约10个月后乳腺中出现了肿瘤性变化。 2) 我们已经构建了在神经胶质和皮肤（如乳腺）中特异性表达 Aurora-A 的转基因小鼠，目前正在观察有丝分裂期和肿瘤形成的异常。我们还将这些小鼠与 p53 敲除小鼠杂交，并观察是否观察到组织特异性变化。