フタホシコオロギ概日系へのセロトニン及びPDFの関与の解析

血清素和 PDF 在双尾蟋蟀昼夜系统中的参与分析

基本信息

批准号：
01F00110
负责人：
富岡憲治
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、セロトニンによる位相反応曲線、PDFmRNAのアンチセンスオリゴによる位相変位の解析、および抗PDF抗体を用いたELISAによる視葉PDF含量の解析を試み以下の結果を得た。1)セロトニンの前駆物質である、5-hydoroxytryptophan(5-HTP,50mMl,22nl)の視葉内微量投与では、主観的夜に位相の後退が、主観的昼に位相の前進が引き起こされた。最大の位相後退はCT18に最大の位相前進はCT6であり、この結果は培養下にある単離視葉をセロトニン処理した場合とよく類似していた。一方、セロトニン(10mM,22nl)の微量投与では主観的夜に約1時間の位相前進が、主観的昼の前半では約1時間の位相後退が生じ、培養実験の結果とは一致しなかった。現在、セロトニン濃度を変えるなどして、この理由を検討中である。2)PDFmRNRのアンチセンスオリゴ(500pmol/ml,32.2nl)の投与では、投与の位相に依存した位相変位が誘発され、主観的昼の後半では約1時間の位相後退が、逆に主観的夜の後半では約1時間の位相前進が生じることが明らかとなった。3)明暗サイクルの下で一日のいろいろな時刻に摘出した視葉からタンパク質を抽出し、抗PDF抗体を用いたELISAにより視葉内PDF含量を検討した。その結果、PDF量は夜の終わりに最も多く、明期に徐々に減少し明期の終わりに最も減少し、その後徐々に増加する周期的な変動を示した。この結果は、PDFが昼の後半から暗期の前半にかけて分泌されている可能性を示唆しており、昨年度得られたPDFの位相反応曲線と合わせて、PDFがこの時期に時計の位相を微妙に調整するらしいことが示唆された。以上の結果から、セロトニンとPDFは概日時計に質的に異なる制御分子として作用することが明らかとなった。セロトニンはすでに時計間の相互作用に関わることが示唆されている。今後、PDFの時計の位相制御が時計機構の中でどのような機能的な意味を持つのかに興味が持たれる。

今年，获得了以下结果，以分析5-羟色胺，通过pDFMRNA抗Sensensensens Oligo对相位位移进行分析，并使用抗-PDF抗体分析视觉PDF含量。 1）在5-羟氧化物的痕量给药（5-HTP，50 mml，22NL）中，这是5-羟色胺的前体，这是一种主观夜晚的相位撤退，导致主观相位前进。最大相位撤退为CT6，在CT18中是最大的相前，结果与培养基下用孤立视觉处理的5-羟色胺的情况非常相似。另一方面，在主观的夜晚，5-羟色胺（10mm，22nl）的痕量主观阶段约为一个小时，在一天上半年的主观一天的上半年，阶段静修一个小时，这与培养实验的结果不符。我们目前正在考虑这个原因，例如改变5-羟色胺浓度。 2）在施用PDFMRNR抗sense寡素（下午500pmol/ml，32.2nl）时，相位位移取决于施用的阶段，在主观午餐的后半部分，大约一个相位撤退小时，但相反，下半年的主观夜晚很明显，前进阶段大约是一个小时。 3）从一天中的不同时间从视觉叶中提取蛋白质，在光周期和黑暗循环下，使用抗-pdf抗体检查了视力中的PDF含量。结果，PDF的数量在夜晚最高，逐渐减少，减少最大，减少最多，并逐渐增加。结果表明，PDF可能从一天的下半年到黑暗时期的上半场分泌，并且PDF很微妙，以及去年获得的PDF冲突曲线，PDF在此方面很微妙。时间。这些结果表明，5-羟色胺和PDF在每日时钟中积极起到控制的分子。血清素已经被建议参与时钟之间的相互作用。将来，我对时钟组织中PDF时钟的相位控制的功能含义感兴趣。