コオロギ色素拡散ホルモン様ペプチドの日周期的発現の分子生物学的解析

蟋蟀色素扩散激素样肽昼夜节律表达的分子生物学分析

基本信息

批准号：
03F03320
负责人：
富岡憲治
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

1.抗PDF抗体を用いて免疫染色を行い、共焦点レーザー顕微鏡により微細形態の検討を行った。視葉板PDFニューロン(PDFLa)の突起は抗体染色で強く染色されるバリコシティーとわずかしか染色されないきわめて細い部分とからなり、細胞体から直接伸張した突起が細かく分枝しながら、視葉板全体を神経支配していることがわかった。視髄PDFニューロン(PDFMe)は同様にバリコシティーを持つが、PDFLaに比べてその突起が太く、PDFLaとは容易に区別できる。PDFMeの突起は視髄前縁部全体にわたり、視葉板と視髄の接する部分まで神経支配しており、いくつかの分枝が視葉板にも進入していた。これらの結果から、PDFLaとPDFMeはそれぞれ異なる機能を有することが示唆された。2.視葉以外に、前額神経節にも左右6対のPDF免疫陽性細胞を確認した。これは初めての発見であり、これらの細胞のPDFの機能が興味深い課題である。3.染色強度の日周性を検討したところ、PDFMeではいずれの細胞でも、恒暗下で細胞体の染色強度に主観的昼に強くなる周期性が見られた。4.一日のいろいろの時刻で視葉からmRNAを抽出し、pdf遺伝子の塩基配列から設計したプライマーを用いて、real-time PCRによりpdf mRNAの発現の日周性を検討した。その結果、内部コントロールとする遺伝子の検討が残されてはいるが、PDFLa, PDFMeともに転写には日周リズムがあり、明期に高くなった。この結果はほぼ細胞体での免疫組織化学の結果と一致しているが、ELISAの結果とは一致しない。この相違は、視葉内の含有量には軸策内での蓄積、分泌など細胞体での合成以外の要因が関与するために生ずると考えられた。

1.使用抗PDF抗体进行免疫染色，并使用共焦激光显微镜检查微观形貌。视神经层 (PDFLa) 中的 PDF 神经元的突起由抗体染色强烈染色的静脉曲张和仅轻微染色的极薄区域组成。视髓 PDF 神经元 (PDFMe) 类似地具有静脉曲张，但其投影比 PDFLa 的投影更厚，使其很容易与 PDFLa 区分开来。 PDFMe突支配视神经髓质的整个前缘，到达视神经板和视神经髓质交汇的区域，并且几个分支也进入视神经板。这些结果表明 PDFLa 和 PDFMe 各自具有不同的功能。 2. 除视叶外，在额叶神经节中还发现了六对 PDF 免疫阳性细胞。这是首次发现，PDF 在这些细胞中的功能是一个有趣的问题。 3.当我们研究染色强度的昼夜模式时，我们发现在所有PDFMe细胞中，在持续黑暗下细胞体的染色强度呈现出周期性，其中主观上染色强度在白天变强。 4.在一天中的不同时间从视叶提取mRNA，并使用根据pdf基因的核苷酸序列设计的引物通过实时PCR检查pdf mRNA表达的昼夜模式。因此，PDFLa 和 PDFMe 的转录都具有昼夜节律，并且在光照期间更高，尽管哪些基因作为内部对照仍有待研究。该结果与细胞体免疫组化结果几乎一致，但与ELISA结果不一致。人们认为这种差异的发生是因为除了细胞体内的合成之外，轴突中的积累和分泌等因素也参与了视神经叶中的内容物。