コオロギ色素拡散ホルモン様ペプチドの日周期的発現の分子生物学的解析

蟋蟀色素扩散激素样肽昼夜节律表达的分子生物学分析

基本信息

批准号：
03F03320
负责人：
富岡憲治
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

1.抗PDF抗体を用いて免疫染色を行い、共焦点レーザー顕微鏡により微細形態の検討を行った。視葉板PDFニューロン(PDFLa)の突起は抗体染色で強く染色されるバリコシティーとわずかしか染色されないきわめて細い部分とからなり、細胞体から直接伸張した突起が細かく分枝しながら、視葉板全体を神経支配していることがわかった。視髄PDFニューロン(PDFMe)は同様にバリコシティーを持つが、PDFLaに比べてその突起が太く、PDFLaとは容易に区別できる。PDFMeの突起は視髄前縁部全体にわたり、視葉板と視髄の接する部分まで神経支配しており、いくつかの分枝が視葉板にも進入していた。これらの結果から、PDFLaとPDFMeはそれぞれ異なる機能を有することが示唆された。2.視葉以外に、前額神経節にも左右6対のPDF免疫陽性細胞を確認した。これは初めての発見であり、これらの細胞のPDFの機能が興味深い課題である。3.染色強度の日周性を検討したところ、PDFMeではいずれの細胞でも、恒暗下で細胞体の染色強度に主観的昼に強くなる周期性が見られた。4.一日のいろいろの時刻で視葉からmRNAを抽出し、pdf遺伝子の塩基配列から設計したプライマーを用いて、real-time PCRによりpdf mRNAの発現の日周性を検討した。その結果、内部コントロールとする遺伝子の検討が残されてはいるが、PDFLa, PDFMeともに転写には日周リズムがあり、明期に高くなった。この結果はほぼ細胞体での免疫組織化学の結果と一致しているが、ELISAの結果とは一致しない。この相違は、視葉内の含有量には軸策内での蓄積、分泌など細胞体での合成以外の要因が関与するために生ずると考えられた。

1。使用抗PDF抗体进行免疫染色，并使用共聚焦激光显微镜检查了微观形态。视板PDF神经元（PDFLA）的突出由静脉曲张组成，其用抗体染色强烈染色，并且仅略微染色的非常薄的部分，并且从细胞体直接延伸的突起将整个光学板支撑，同时分支细分支。光学pylepto-PDF神经元（PDFME）具有相似的变异性，但它们的突起比PDFLA厚，使其易于与PDFLA区分开。 PDFME突起将视觉胸膜的整个前边缘支配到了接触视觉胸肌的部分，其中几个分支也进入了视觉pecories。这些结果表明PDFLA和PDFME各自具有不同的功能。 2。除了视神叶外，还在左侧和右侧的额头神经节中证实了六对PDF免疫阳性细胞。这是第一个发现，PDF在这些细胞中的功能是一个有趣的问题。 3。在检查染色强度的昼夜特性时，PDFME表明，在两个细胞中，在恒定的黑暗下，在白天，细胞体内的染色强度在主观上更强。 4。在一天中的不同时间从视觉叶中提取mRNA，并使用从PDF基因的基础序列设计的引物通过实时PCR检查了PDF mRNA表达的昼夜性。结果，尽管研究仍然对用作内部对照的基因进行研究，但PDFLA和PDFME的转录昼夜节奏都在光时期增加。该结果几乎与免疫组织化学相一致，导致细胞体，但与ELISA结果不一致。人们认为这种差异是由于细胞体中的合成以外的其他因素的参与而引起的，例如轴突内的积累和分泌。