脊椎動物の季節性測時機構の解明

阐明脊椎动物的季节计时机制

基本信息

批准号：
07J08345
负责人：
中尾暢宏
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

光周性の制御機構には、下垂体隆起葉で時刻依存的に光誘導を受け発現するTSHBがマスターコントロール遺伝子として働いている(Nakao et al.Nature,2008,452,317-322)。しかし、TSHBと同時期に発現するEYES ABSENT 3(EYA3)の光周性における役割、およびTSHB,EYA3の時刻依存的な光誘導発現調節機構は不明であり、これらを解明することは光周性の全貌の解明に繋がると考えられる。そこで、本年度の研究実施計画に示したように計画1.EYA3のターゲット遺伝子の同定、計画2.光周時計と臨界日長の関係を解明することを目標とした。計画1では、EYA3が転写共役因子であることから、免疫染色法により下垂体隆起葉におけるEYA3の時刻依存的な細胞内局在を明らかにし、EYA3が転写制御に関わる時間帯を決定した。この時間帯におけるウズラ下垂体隆起葉とウズラEYA3抗体を用いたChIP-sequenceにより104遺伝子の候補遺伝子を抽出することができた。今後、これらの遺伝子とEYA3の相互作用を解析する必要かおる。計画2では、光周時計候補遺伝子は、約77遺伝子が存在する。これらの発現部位を検討した結果、下垂体隆起葉では14遺伝子と概日時計の構成因子である時計遺伝子が発現していた。次にウズラTSHBおよびEYA3遺伝子の転写調節領域を含む約40kbpの核酸配列を決定し、転写因子結合領域を検索した。ルシフェラーゼアッセイによりシスエレメントの機能性を検討したところ、両遺伝子ともに転写活性を示したが、そのシグナル伝達経路は異なる可能性を示唆する結果が得られた。

在光周期控制机制中，TSHB是在垂体脊叶中诱导和表达的时间依赖的光（Nakao etal。Nature，2008，452，317-322）。然而，在光周期中与TSHB同时表达的眼睛3（EYA3）的作用以及光诱导的TSHB和EYA3的表达调节的时间依赖性机制尚不清楚，并且阐明这些结果可能导致这些结果的全部图片阐明光pphatoperoperoperiodicientic的全部图片。因此，如今年的研究实施计划所示，目标是确定计划1。EYA3的目标基因，目标是澄清光周期时钟与关键光周期性之间的关系。在计划1中，由于EYA3是转录共价因子，因此免疫染色显示了垂体脊叶中EYA3的时间依赖性亚细胞定位，并且确定了EYA3参与转录调节的时间段。在此期间，使用鹌鹑垂体脊和鹌鹑eya3抗体通过芯片序列提取104个基因的候选基因。将来有必要分析这些基因与EYA3之间的相互作用。在计划2中，存在大约77个光周期候选基因。由于检查了这些表达位点，14个基因和时钟基因（这是昼夜节律的成分因素）在垂体脊叶中表达。大约然后确定40 kbp核酸序列，这些核酸序列包含鹌鹑TSHB和EYA3基因的转录调节区域，并搜索转录因子结合区域。当通过荧光素酶测定法检查顺式元件的功能时，两个基因均显示转录活性，但结果表明信号传导途径可能有所不同。