ユビキチン依存的蛋白分解を指標とする癌関連遺伝子の探索

以泛素依赖性蛋白质降解为指标寻找癌症相关基因

基本信息

批准号：
12877356
负责人：
横沢英良
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

癌抑制因子でもある転写因子IRF-1がSUMO-1化修飾を受けることを発見し、SUMO-1化修飾による機能制御について解析し、以下の結果を得た(投稿中)。1.yeast two-hybrid systemを用いてIRF-1結合蛋白質を探索し、SUMO-1に対する結合酵素(E2')であるUBC9と、転写因子STAT3の阻害蛋白質であるPIAS3を、IRF-1結合蛋白質として同定した。さらに、PIAS3がSUMO-1化修飾におけるリガーゼ(E3')として機能する可能性を証明するために、SUMO-1とPIAS3を用いて、IRF-1とともに293T細胞へのトランスフェクションを行い、IRF-1が,PIAS3依存的にSUMO-1化されることを見いだした。2.SUMO-1化修飾がIRF-1の転写活性に対する影響を調べるために、IRF-1,SUMO-1およびPIAS3の発現ベクターを用いたリポーターアッセイを行い、SUMO-1とPIAS3を共発現させた場合に、IRF-1の転写活性が抑制されることを見いだした。IRF-1の転写活性の抑制がSUMO-1化修飾によるかを解析するために、PIAS3のSUMO-1リガ-ゼ活性の発現に必須なRING fingerドメインのCys残基をSerに置換したC334S変異体を作成し、IRF-1に対するSUMO-1リガーゼ活性とIRF-1の転写活性に対する影響を調べた。そして、C334S変異体では、野生型PIAS3と比較して、IRF-1のSUMO-1化修飾が減少し、IRF-1の転写活性に対する抑制効果が失われることを見いだした。以上の結果から、PIAS3は、IRF-1のSUMO-1化修飾を促進することで、IRF-1の転写活性を負に制御していることを明らかにした。

我们发现同为肿瘤抑制因子的转录因子IRF-1经过了SUMO-1修饰，并分析了SUMO-1修饰的功能调控，得到了以下结果（目前已提交）。 1.利用酵母二杂交系统寻找IRF-1结合蛋白，SUMO-1的结合酶（E2'）UBC9和转录因子STAT3的抑制蛋白PIAS3被检测为IRF-1结合它被鉴定为蛋白质。此外，为了证明PIAS3在SUMO-1修饰中充当连接酶(E3')的可能性，我们用SUMO-1和PIAS3与IRF-1一起转染293T细胞，发现1与SUMO-缀合。 1 以 PIAS3 依赖的方式。 2.为了研究SUMO-1修饰对IRF-1转录活性的影响，我们使用IRF-1、SUMO-1和PIAS3的表达载体进行了报告基因测定，并共表达了SUMO-1和PIAS3。当IRF-1的转录活性被抑制时为了分析IRF-1转录活性的抑制是否是由于SUMO-1修饰所致，其中RING指结构域中的Cys残基发生C334S突变，该突变对于PIAS3的SUMO-1连接酶活性的表达至关重要，被 Ser 取代。我们创建了针对 IRF-1 的 SUMO-1 连接酶活性及其对 IRF-1 转录活性的影响。他们还发现，在C334S突变体中，与野生型PIAS3相比，IRF-1 SUMO-1修饰减少，并且失去了对IRF-1转录活性的抑制作用。上述结果表明PIAS3通过促进SUMO-1对IRF-1的修饰来负向调节IRF-1的转录活性。