歯根膜組織の老化機構に関する研究

牙周膜组织衰老机制的研究

基本信息

批准号：
12877301
负责人：
沢禎彦
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877301/
关键词：
歯根膜テロメアテロメラーゼ TRAP 老化 p53 オステオカルシン

项目摘要

本年度は,ヒト培養歯根膜細胞のテロメア長分析を行った.その結果,1)1回の分裂で切れるテロメア長は150bpで,50-100bp/回という従来の報告とほぼ一致した.2)平均的テロメア長は表皮線維芽細胞の平均的テロメア長である16kbpより短かった.3)ドナー年齢に相関したテロメア短小化は観察されなかった.4)同一のドナー由来の歯根膜組織から,平均3kbpの短いテロメア長を有する株と,平均13kbpの長いテロメア長を有する株が,またその両者をカバーする範囲のテロメア長を示す株が確立された.本結果から,歯根膜線維芽細胞は年齢に相関せず一般的に短いテロメアを有することが示唆され,表皮など他の一般的結合組織繊維芽細胞よりも細胞寿命の短い可能性が考えちれた.一方,歯根膜細胞株のあるものは長いテロメアを示したことから,歯根膜におけるテロメラーゼ活性発現型歯根膜幹細胞の存在を考えた.テロメア長を検索した細胞株について,そのテロメラーゼ活性をTRAPアッセイによって測定し,また免疫染色によってテロメラーゼ蛋白発現を検索した.その結果,1)TRPPアッセイでは,典型的なテロメラーゼ活性を示す結果は得られなかったが,細胞株のテロメア長とは関係なく,弱いテロメラーゼ活性の存在を示唆する増幅されたTRAP産物が観察された.2)抗テロメラーゼ抗体陽性の細胞が観察された.以上について,申請者は現在投稿準備中であり,今後,歯根膜幹細胞の探究と分離を試み,培養歯根膜作製への応用を目標とする基盤研究を申請する.

今年，我们对培养的人牙周膜细胞的端粒长度进行了分析。结果表明：1）一次分裂中可断裂的端粒长度为150 bp，与之前报道的50-100 bp几乎一致。 bp/部门； .2) 平均端粒长度比表皮成纤维细胞的平均端粒长度短，即16 kbp。 3) 没有观察到与供体年龄相关的端粒缩短。从历史牙周膜组织中，建立了一个端粒长度平均为 3 kbp 的短菌株、一个端粒长度平均为 13 kbp 的长菌株以及一个端粒长度范围覆盖两者的菌株。根据该结果，有人提出，无论年龄如何，牙周膜成纤维细胞通常都具有较短的端粒，并且认为它们可能比其他一般结缔组织成纤维细胞（例如表皮）具有更短的细胞寿命。另一方面，由于一些牙周膜细胞系表现出长端粒，我们认为牙周膜中存在表达端粒酶活性的牙周膜干细胞。通过TRAP测定检测端粒长度的细胞系的端粒酶活性。结果表明：1）TRPP检测显示典型的端粒酶蛋白表达尽管没有获得表明端粒酶活性的结果，但是观察到扩增的TRAP产物表明存在弱端粒酶活性，而与细胞系的端粒长度无关。2)观察到抗端粒酶抗体呈阳性的细胞。目前正在准备提交材料，并将申请旨在探索和分离牙周膜干细胞并将其应用于培养牙周膜生产的基础研究。