Elucidation of the molecular basis of oral-renal association by periodontal disease exosomes in exacerbation of diabetes and complications of nephropathy

牙周病外泌体阐明糖尿病恶化和肾病并发症中口腔-肾脏关联的分子基础

基本信息

批准号：
22H03302
负责人：
沢禎彦
金额：
$ 11.23万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H03302/
关键词：
糖尿病腎症エクソソーム SGLT2 TLR 歯周病糖尿病性腎症 P. gingivalis F. nucleatum 歯周疾患

项目摘要

本研究は歯周病を有する糖尿病環境の口腎エクソソーム連関による腎症と糖尿病増悪の分子機構の解明を目的とする。すなわち、糖尿病腎糸球体・尿細管では、歯周病感染組織エクソソームの内包する炎症・病原性因子に高血糖刺激で発現の亢進した細胞内受容体が過剰応答することで糸球体の慢性炎と硬化症が促進し尿細管間質性炎を誘発、SGLT2過剰発現による糖尿病増悪連鎖が合して複雑系を形成すること、TLRなど歯周疾患エクソソーム内包物受容体のSNPが腎症に至る責任遺伝子、すなわち腎症合併と糖尿病増悪連鎖の個人差の遺伝的背景となる仮説を分子疫学的に検証する。本年度は、ヒト・マウス口腔組織由来線維芽細胞・上皮細胞の歯周病原菌成分添加培養上清を収集し、超遠心分離、ポリマー沈殿、エクソソームマーカーCD9/CD63/CD81特異抗体を用いた免疫沈降法で培養細胞由来エクソソームを分離することができた。このエクソソームをヒト・マウス培養血管内皮細胞・近位尿細管細胞に投与、IFNβ/γ、TNFα、IL-6分泌量の増大、TLR7/8/9活性化信号の増加、およびNF-kB, IRF3など関連転写因子の核内移行を確認することができた。さらに、エクソソームcargo物質のマイクロフルイディック分析と核酸・蛋白マイクロアレイにて蛋白・microRNAを特定中である。また、Streptozotocin投与膵島β細胞破壊型I型糖尿病ICRマウス頬粘膜下に歯周病原菌成分を投与した腎症群のTLR7/8/9発現増大を確認することができた。さらには、収集したエクソソームを蛍光標識して糖尿病マウス尾静脈に投与後、蛍光標識エクソソームのマウス腎組織内分布を検索することができた。以上について現在論文執筆中である。

这项研究旨在阐明糖尿病环境中肾脏病和糖尿病外泌体连接的分子机制。换句话说，在糖尿病性肾小球和小管中，通过高血糖增强了细胞内受体，其在牙周感染的组织的外泌体中含有炎症和致病因子，慢性肾小球和硬化症促进了慢性肾小球和层状体系，并促进了层状体系，并促进了层状体系，并促进了层状体系，并促进了体系症的体系良好，并且流行病学测试的假设是导致牙周疾病外泌体中SNP的假设，导致肾病，即肾病和糖尿病外泌体链的个体差异。今年，收集了人和小鼠口腔组织衍生的成纤维细胞和上皮细胞的牙周致病成分的培养上清液，并使用Exosome Marker CD9/CD6/CD63/CD63/CD81特定于培养的细胞衍生的外泌体分离了培养的细胞衍生的外泌体。该外泌体被用于人和小鼠培养的血管内皮细胞和近端管状细胞，并且有可能确认IFNβ/γ，TNFα和IL-6分泌的量增加，TLR7/8/8/9激活信号的增加，以及诸如NF-KB和IRF3和IRF3的相关转录因素的核转移因素。此外，正在使用外泌体货物物质，核酸和蛋白质微阵列的微流体分析来鉴定蛋白质和microRNA。此外，已经证实，肾病组的TLR7/8/9的表达增加了，该肾病是链霉菌素 - 胰岛胰岛β-细胞破坏I型I型糖尿病ICR小鼠的表达。此外，在荧光标记收集的外泌体并将其施用到糖尿病小鼠的尾静脉上后，可以搜索小鼠肾脏组织中荧光标记的外泌体的分布。我目前正在写上述论文。