転写調節因子NFκBの不活性化による放射線抵抗性がんの感受性化機構

转录调节因子 NFκB 失活对放射抗性癌症的致敏机制

基本信息

批准号：
12217071
负责人：
宮越順二
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217071/
关键词：
放射線感受性遺伝子導入 NF-κB IKB-α 脳腫瘍細胞リン酸化

项目摘要

本課題は種々の遺伝子発現に深く係わっていると考えられるNF-κBの機能を調節しているI-κBα遺伝子の導入により、分子レベルにおける細胞の内因性放射線感受性を支配している機構を解析しようとすることである。放射線抵抗性脳腫瘍細胞にNF-κBの阻害蛋白であるI-κBα遺伝子を変異型(非リン酸化型)として導入し、以下の知見を得た。1.IκB-α遺伝子のリン酸化部位(32および36番のセリン、42番のチロシン)のアミノ酸を塩基置換により変更し、このcDNAを発現ベクターpcDNA3に組み込んで、ヒト脳腫瘍由来細胞(MO54)に導入し、得られたクローンの放射線感受性化の程度を調べた結果、両セリンの置換(Sと略す)ならびにチロシンの置換(Yと略す)で放射線感受性化がさらに増し、これらすべてのリン酸化阻害によって、最も著しい放射線感受性化が認められた。2.Tumor necrosis factor-α(TNF-α)20ng/mlの12時間処理により、S-IκB-α、Y-IκB-αクローンにおいては顕著なアポトーシスが観察された。親株やベクター単独のネガティブコントロールではこのアポトーシスは観察されなかった。3.放射線照射後の細胞周期分布については、親株やネガティブコントロールでG1期やG2期アレストが観察されたが、SY-IκB-αクローンではこれら休止期のアレストはわずかであった。4.リン酸化阻害剤herbimycin A(1μg/ml)を2時間処理すると、親株の放射線感受性は高まったが、SY-IκB-αクローンの放射線感受性に変化は認められなかった。5.放射線に加え、紫外線(UV)や制がん剤のアドリアマイシン(ADR)の感受性をそれぞれのクローンで調べた結果、S-IκB-αおよびY-IκB-αクローンで致死効果は増強した。両リン酸化阻害のSY-IκB-αクローンでは、放射線と同様、さらに著しいUVとADR感受性化が観察された。6.放射線誘発の突然変異について解析したところ、ネガティブコントロールに比較して放射線感受性化されたSY-IκB-αクローンでは著しくHPRT遺伝子の突然変異頻度が上昇した。

这个问题是通过引入I-κBα基因来分析分子水平内源性放射敏感的机制，I-κBα基因调节NF-κB的功能，该基因被认为与各种基因表达深深涉及。通过引入NF-κB的抑制蛋白I-κBα基因作为突变体（非磷酸化形式）获得以下发现。 1。在IκB-α基因的磷酸化位点的氨基酸（第32和36号的丝氨酸，第42位的酪氨酸，酪氨酸在42中）被基础替代改变，并将该cDNA纳入表达矢量pCDNA3，并引入到人脑肿瘤源细胞（MO54）中（MO54），并检查了散热敏感性。结果，通过丝氨酸（缩写为S）和酪氨酸取代（缩写为Y）的取代进一步增加了放射敏化，并且通过抑制所有这些磷酸化来观察到最显着的辐射敏感性。 2。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）处理12小时，在S-IκB-α和Y-IκB-α克隆中显示出明显的凋亡。单独的父菌株或载体的阴性对照中未观察到这种凋亡。 3。关于辐射后的细胞周期分布，在父母菌株和阴性对照中观察到G1和G2停滞，但这些端基因骤停在SY-IκB-α克隆中很小。 4。用磷酸化抑制剂草食霉素A（1μg/ml）治疗2小时增加了父菌株的放射敏度，但是在SY-IκB-α克隆的放射线敏感性中未观察到变化。 5。除了辐射外，我们还研究了每个克隆的紫外线射线（UV）和抗癌药物阿霉素（ADR）的敏感性，并通过S-IκB-α和Y-IκB-α克隆来增强致命作用。在两种抑制SY-IκB-α克隆的磷酸化中，都观察到更重要的UV和ADR敏感性，以及辐射。 6。辐射诱导的突变的分析表明，与阴性对照相比，在放射敏化的SY-IκB-α克隆中，HPRT基因中突变的频率显着增加。